中心复合设计(CCD)，响应面法(RSM)，统计方法，构成了确定最优工艺参数的有力工具。这些统计方法已广泛用于生物过程优化以增强增值产品的生产，而很少有报道RSM应用于有毒物质的抑制作用[14][15]。

因此，本研究的目的是(1)通过响应面的方法研究Cu（II）和Zn（II）对anammox活性的交互作用；(2)Cu(II)和Zn(II)对anammox颗粒污泥的蓄积毒性作用；(3)在不存在基质或只存在NO2的情况下，Cu(II)对anammox细菌的预暴露作用。

2、方法

2。1污泥的来源

所有批次实验中使用anammox颗粒污泥。污泥取自实验室规模(2L)升流式厌氧污泥床(UASB)反应器中。这些成熟的anammox颗粒具有良好的沉降性能(沉降速率超过70 m h-1)和较好的颗粒直径(平均5。1±1。6mm)。Anammox颗粒活性(SAA)为444。4±26。1 mgTN g VSS-1 d-1。文献综述

2。2急性暴露的活性测定和anammox活性的测定

批次预暴露试验在总体积为160ml的血清瓶中进行，液相体积为120ml，包括100ml的基质和各1。25ml的微量元素I和II，无机盐由10 mg L-1KH2PO4，5。6 mg L-1CaCl2·2H2O，300mg L-1MgSO4·7H2O，和1250 mg L-1KHCO3组成，微量元素I由5 g L-1EDTA和9。14 g L-1FeSO 4·7H2O组成，微量元素II由15 g L-1EDTA，0。014 g L-1H3BO4，0。99 g L-1MnCl2·4H2O，0。25 gL-1CuSO4·5H2O，0。43 g L-1ZnSO4·7H2O，0。21 g L-1NiCl2·6H2O，0。22 g L-1NaMoO4·2H2O和0。24 g L-1CoCl2·6H2O组成。新鲜颗粒污泥取自母反应器，并用无机盐清洗三次。然后，血清瓶中接种大约10mlanammox菌(2。0 gVSS L-1 )，添加(NH4)2SO4 , NaNO2 , CuCl2·2H2O和ZnCl2·2H2O到基质中。并通过添加0。1molL-1的盐酸调节pH值，使其固定在7。5左右，然后，随着氩气曝气10min，血清瓶用橡胶密封置于振荡培养箱(180 rpm)，并使其处于35±1°C温度避光条件下。用注射器定时取3ml样品储存于4°C冰箱中，用于测定NH4+和NO2–。SAA能通过NH4+和NO2–的浓度--时间斜率计算得出并用mgTN g VSS-1 d-1表示出来[16]，标准化活性(NAA，%)=SAA抑制剂/SAA对照×100。