摘    要 众所皆知，癌症是发病率和致死率最高的疾病之一，为了克服癌症，科学家们做出了很多的努力，值得庆幸的是抗癌药物克唑替尼的出现，而(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇是合成抗癌药物克唑替尼的关键的手性前体药物。本实验首先实现了乙醇脱氢酶(ADH)和醛酮还原酶(AKR)在 E。coli BL21(DE3)中的表达，并将其纯化。后将纯化后的ADH和AKR用来催化合成克唑替尼关键手性中间体(S)-1-2,6-二氯-3-氟苯乙醇。实验证明，1、醛酮还原酶的最佳诱导条件是24℃，150RMP，乙醇脱氢酶的最佳诱导条件是18℃，200RPM。2、经纯化后产生的纯酶活较粗酶而言，酶的活性有了很明显的改善。3、双酶体系催化较单酶体系催化而言，构建了辅酶再生循环体系，节约了成本。90400

Abstract As we all know, cancer is one of the highest rates of morbidity and mortality。 In order to overcome the cancer, scientists have made a lot of effort, it is fortunate that the emergence of anticancer drug clozoitin, and (S) 1- (2,6-dichloro-3-fluorophenyl) ethanol is a key synthetic chiral prodrug for the synthesis of anticancer drugs。 In this study, the expression of alcohol dehydrogenase (ADH) and aldehydes and ketones reductase (AKR) in E。 coli BL21 (DE3) was first achieved and purified。 The purified ADH and AKR were used to catalyze the synthesis of the key chiral intermediate (S) -1-2,6-dichloro-3-fluorophenylethanol。 Experiments show that 1, the best induction conditions of aldehydes and ketones reductase is 24 ℃, 150RMP, the best induction conditions of alcohol dehydrogenase is 18 ℃, 200RPM。 2, after purification of pure enzyme produced by the crude enzyme, the enzyme activity has been significantly improved。 3, double enzyme system catalysis than the single enzyme system catalysis, the construction of a coenzyme regeneration cycle system, saving the cost。

毕业论文关键词： 辅酶再生；  还原型辅酶I；  醛酮还原酶； 乙醇脱氢酶；

Keyword:  Coenzyme regeneration;  reduced coenzyme I;  aldose reductase;  ethanol dehydrogenase

目  录

摘    要 3

目  录 4

一、 前言 5

1。1克唑替尼的研究进展 5

1。1。1克唑替尼 5

1。1。2克唑替尼的合成路线 6

1。2  手性醇的合成 7

1。2。1手性醇的化学法合成 7

1。2。2手性醇的生物法合成 7

1。3实验背景概述 8

1。3。1还原反应中辅酶的循环再生 8

1。3。2制备克唑替尼关键手性前体的方法 9

二、 主要研究内容 10

三、 实验部分 10

3。1材料与仪器 10

3。1。1实验仪器 10

3。1。2实验试剂 11

3。2实验步骤 11

3。2。1 DNA转化 11

3。2。2提质粒和跑核酸胶 12

3。2。3菌种保存 12

3。2。4目的基因的异源表达 12

3。2。5收集菌种 12

3。2。6大肠杆菌细胞壁的破碎