3。2。7聚丙烯酰胺凝胶板的制作 13

3。2。8蛋白质凝胶电泳的检测 13

3。2。9纯化过柱和透析 13

3。2。10酶活性的检验 14

3。2。11酶催化反应 14

3。3实验结果与讨论 14

3。3。1 重组质粒目的片段源Q于W优H尔J论K文M网WwW.youeRw.com 原文+QQ75201.,8766 的验证 14

3。3。2 SDS-PAGE对蛋白可溶性的检测 15

3。3。3酶活性的测定 16

3。3。4蛋白浓度的测定以及NADPH标准曲线的测定 16

3。3。5辅酶再生循环催化制备（S）-1-（2，6二氯3氟苯基）乙醇 18

四、 展望 23

参考文献 24

致  谢 26

一、前言

    癌症，因其高致死率和难治愈率而广为人知。然而2011年在美国上市的药物克唑替尼（Crizotinib）在治疗肺癌方面有了性的突破。该药在合成过程中的难点之一是合成带有对映选择性的关键中间体(S)-1-(2,6-二氯-3-氟-苯基)乙醇。研究表明，若能够较为高效及高对映选择性的合成(S)-1-(2,6-二氯-3-氟-苯基)乙醇这一关键中间体，能够产生更高的社会效益，进而推动相关医药行业的发展。

1。1克唑替尼的研究进展

1。1。1克唑替尼 

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是肺癌[1]最为常见的一种类型。约占肺癌总数的 80%，大部分病例在确诊已然是晚期[2]。

自上世纪90 年代以来，IV 期非小细胞肺癌的治疗一直是以铂类药物为主的联合化疗[3]。虽然化疗对进展期 NSCLC 的总生存期有一定的提高。但仍有15%~30%对其耐药[4]，且化疗 5 年生存期仍低于 5%[5]。以铂类为基础的化疗在治疗上已经处于平台期，疗效的进一步提高主要依赖于新治疗策略的建立和完善。来自优W尔Y论W文C网WWw.YoueRw.com 加QQ7520,18766  

科学家对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）在生物学行为、基因突变及耐药性方面的深入研究，使肺癌治疗进入了靶向治疗的新时代。克唑替尼是间变性淋巴瘤激酶（ALK），间叶组织上皮样变（MET），原癌基因蛋白酪氨酸激酶（ROS1）的多靶点酪氨酸激酶抑制剂。实验显示克唑替尼在体内和体外均对 MET 和 ALK 有着强抑制作用，并能有效抑制肿瘤生长，且具有良好的药学和安全特性。根据克唑替尼卓越的临床疗效，由辉瑞公司研发的克里唑替尼[6]（Crizotinib，商品名：Xalkori）用于治疗 ALK 基因重排的 NSCLC，于 2011 年 8 月 26 日获得美国 FDA 批准使用，是 FDA 第一个批准进行Ⅲ期临床实验的 ALK 酪氨酸激酶受体抑制剂。之后在多个国家（含中国）批准上市。该药的发明及应用代表了个体化治疗的重大突破，是抗癌新药开发的又一个里程碑。

 克唑替尼化学名称为 3-[(R)-1- (2,6-二氯-3-氟苯基）乙氧基]-5-[1-(哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-胺，化学结构式见图 1-1，相对分子质量为 450。34，分子式为C21H22Cl2FN5O，性状为白色至浅黄色粉末。

图1-1克唑替尼的结构式

1。1。2克唑替尼的合成路线

 目前克唑替尼的合成路线大都用这两条路线。一是（图1-2）以2,6-二氯-3-氟苯乙酮经马肝脏醇脱氢酶还原和Mitsunobu反应，制得硝基化合物5，然后用铁粉将其还原并用NBS处理后得到溴化物7，之后与硼酸酯进行Suzuki偶联反应得到化合物9，脱去保护基团后就得到克唑替尼[7]