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1.4.2叶酸的应用及研究状况
近些年来，叶酸介导靶向肿瘤的研究得到迅速发展，该研究的应用主要有：（1）与蛋白质偶联；（2）与小分子化疗药物相接；（3）制成叶酸脂质体；（4）制成叶酸纳米粒。
Aronov等[24]将叶酸与PEG连接，再通过化学键合得到了一种PEG化卡铂类似物FA-PEG-Pt。与PEG-Pt相比，FA-PEG-Pt通过叶酸受体途径能更有效地被肿瘤细胞摄取，但形成的DNA结合物相对较少、细胞毒性较低。Ladino等[25]将美登毒素与叶酸通过二硫键连结起来。通过叶酸受体介导途径进入肿瘤细胞，是一种活性强、特异性高的叶酸靶向的低相对分子质量的化疗药物。
将脂质体与叶酸相连后，叶酸靶向使脂质体和药物的分布由肿瘤细胞外转入细胞内。从而延长了脂质体在肿瘤的保留时间，提高了脂质体药物对肿瘤细胞的药效。Lee等[26]合成了叶酸-PEG-DSPE（二硬脂酰磷脂酰乙醇胺）结合物，制成包裹阿霉素的叶酸脂质体。结果显示，叶酸修饰的阿霉素脂质体的KB在体外分别用含高密细胞摄取比阿霉素脂质体或游离的阿霉素分别高45和1.6倍，细胞毒性分别高86和2.7倍。
张良珂等[27]人先将白蛋白备成纳米粒，而后与叶酸偶联，再用异硫氰酸荧光素对其进行标记，最后用荧光定量的方法观察肿瘤细胞射纳米粒的摄取情况，证实了可通过叶受体介导的方法将药物浓集于叶酸受体丰富的肿瘤部位。梁兵等[28]用化学方法合成了可降解性FA-PEG-PEI和PEG-PEI，并研究其负载质粒DNA的能力，比较所形成纳米材料/DNA复合物在体外对细胞的毒性大小及其转染效率。通过MTT法证实了复合物在C6、293T、HepG2 三种细胞中的细胞毒性表面漆细胞毒性比常用PEI 25ku低；类似的，通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜更直观的检测了转染效果，FA-PEG-PEI对C6、293T细胞都有靶向效果且在N/P比为15时靶向效果最好，而在HepG2细胞中没有靶向效果。张宏征等[29]采用化学共沉淀法制备了顺铂纳米药物并通过聚乙二醇二胺连接叶酸分子合成叶酸-顺铂纳米药物（FA-MNP-CDDP），并研究该药物对人鼻咽癌细胞的体外靶向治疗作用。用普鲁士蓝染色法证实了表达叶酸受体的HNE-1细胞对该纳米药物摄取能力显著强于不表达叶酸受体的CNE-2细胞该纳米药物的细胞摄取能力，MTT法证实了该纳米药物对HNE-1细胞的体外抑制效果明显。
1.5 本课题研究目的及意义
本课题研究通过化学方法合成出分散性好的 NIPAM-PEI 聚合物纳米粒，用叶酸进行修饰制得主动靶向药物载体，将其负载药物阿霉素并研究其负载效果，确定载药颗粒体外释放性能。通过红外光谱对叶酸所修饰的纳米粒进行测定，确定其分子结构。研究接枝PEI后的聚合物及叶酸修饰后的聚合物的温度敏感性的差别。测定凝胶在不同溶剂下的溶胀行为，研究载药系统在两种不同温度和pH下的体外释放行为。合成制备路线示意图如图1-2。
图1-2 聚合物合成路线示意图
本课题研究了叶酸修饰功能性聚合物纳米粒的制备方法，并对其性能进行了表征和体外给药研究，制备的复合物具有良好的靶向性能，期望研究能为此复合颗粒成为抗肿瘤药物良好的靶向载体材料，为临床实验打下良好的基础。
2. 实验内容2.1 实验原料与设备2.1.1 实验原料实验所用原料见表2-1