2。1。3 工具酶和试剂盒 7

2。1。4 分子量标准 7

2。1。5 培养基 7

2。1。6 缓冲液以及其他溶液 7

2。1。7 主要仪器及设备 8

2。2 实验方法 9

2。2。1 实验具体流程 9

2。2。3 基础实验操作 11

3 实验结果 15

3。1 DNA 浓度检测 15

3。1。1 质粒 DNA 的浓度检测 15

3。1。2 凝胶回收质粒 DNA 浓度的测定 16

3。1。3 转化后质粒 DNA 浓度的测定 17

3。2 转化实验对照检测 18

3。3 酶切回收 18

3。4 酶切验证 19

第 Ⅱ 页

本科毕业设计说明书

4 结论 21

5 课题展望 21

致 谢 22

参考文献 23

1 绪论

随着经济的发展社会的不断进步，人们在满足衣食住行之后，开始把目光放 在身心的健康发展上，人们越来越关注自己健康。然而环境的污染，包括空气污 染，水污染，土壤的污染，以及生活得快节奏，高强度的工作，巨大的工作压力， 也使人类健康受到巨大的威胁，各种疾病屡见不鲜，甚至肆意传播。科研人员对 各种疾病的研究也渐渐深入和全面，科研人员开始从生物分子的层面对人类的生 理原理进行更深层次的探究，其中基因疗法是对抗疾病的种独特的新方法。犯病 时，对关键性的起作用的蛋白质和基因为靶点进行治疗，另外在遗传病中，还能 够弥补基因先天性缺陷，这对从根源治疗疾病也有其重要意义[1]。膜蛋白是嵌在 生物膜中的一种蛋白质，是生物膜功能的主要体现者和承担者，因此膜蛋白可以 作为许多药品分子的靶点，膜蛋白根据其所处的位置，可分为外周膜蛋白，内在 膜蛋白，和脂锚定蛋白[2]。受磷蛋白（PLN）便是其中的一种内膜蛋白，它在心 血管疾病方面有重要研究意义。通过高分辨率的质谱可以实现破译它的调节控制 机制。然而这项研究的基础，就是获得毫克级的高纯度的受磷蛋白。

1。1 受磷蛋白概述

受磷蛋白是一种跨膜蛋白，在肌浆网中进行表达，它是心脏心肌收缩和β- 肾上腺素的基本调节蛋白[3]。它能抑制钙泵—Ca2+-ATPase（SERCA）的活性， Ca2+-ATPase 是一种小的膜蛋白。受磷蛋白通过控制 Ca2+-ATPase 的活性来控制 心肌细胞中 Ca2+的循环，如果人类身体里 Ca2+的循环失常，就可能会引发各种心 血管疾病。而对受磷蛋白实施可逆的磷酸化作用将会取消这种抑制作用，这就为 各种心理疾病的治疗找到了突破口。