响应面法优化富硒平菇发酵工艺条件(3)
1.2.2.2麦麸含量的单因素试验
将固体培养基按照每袋中棉籽壳250 g、蔗糖3.75 g的比例混匀，然后在9份中分别加入麦麸20、30、40、50、60、70、80、90、100 g充分混匀后加入浓度不同的Na2SeO3溶液，制成在硒元素单因素试验获得的含硒量最高的培养基。分别装袋并贴上标签，严格灭菌后在超净试验台上接种，然后放在阴凉、潮湿的地方。后面采用与硒元素单因素试验一样的处理。
1.2.2.3蔗糖含量的单因素试验
将固体培养基按照上述试验中最优棉籽壳与麦麸的比例混匀，然后在9份中分别加入蔗糖3.00、3.75、4.50、5.25、6.00、6.75、7.50、8.25、9.00 g充分混匀后加入浓度不同的Na2SeO3溶液，制成在硒元素单因素试验获得的含硒量最高的培基。分别装袋并贴上标签，后面进行与硒元素单因素试验一样的处理。
1.2.3响应面法试验
根据单因素试验中确定的平菇培养基成分的最佳配比范围，进行响应面试验的设计。采用Design Expert软件设计响应面法试验，本次试验采用了Box-Behnken试验方法。试验方案如下表
表3响应面法设计因素和水平
Table 3 the response surface method design factors and levels
因素
水平 A麦麸（g/kg棉籽壳） B蔗糖（g/kg棉籽壳） C硒元素（mg/kg培养料）
-1 160 15 100
0 240 22.5 250
1 320 30 400
按照软件设计的试验方案进行培养基的配制，并从1-17号进行标记。装袋完成后进行严格灭菌并在超净试验台接种，放在阴凉潮湿的地方。待其菌丝爬满培养基时，拆袋处理，并按时洒水直到平菇生长成熟。后面进行与硒元素单因素试验一样的处理。
1.2.4验证性试验
响应面设计软件分析得到最优组合之后，按照最优组合配制培养基，并分装成三袋进行灭菌处理。后面的试验步骤和响应面法试验一致。
2.结果与分析
2.1硒标准曲线的绘制
以硒含量为横坐标，测定的OD值为纵坐标，绘制硒标准曲线如图1。可以依据测得的其他各组平菇的OD值带入标准曲线计算硒含量。
图1 硒标准曲线
Fig 1 selenium standard curve
2.2单因素试验的结果及分析
2.2.1硒元素单因素试验结果
由图2可以看出，在一定的范围内，平菇菌丝的生长速度和平菇中的硒元素OD值随着培养基中的硒元素含量增加而增加的。所以综合两个指标可以得出结论:最适宜平菇生长的硒元素含量为250 mg/k培养料,平菇的耐硒范围为100 mg/kg-400 mg/kg固体培养料。
图2 硒元素对菌丝生长速度影响
Fig 2 Selenium element effect on mycelial growth rate
2.2.2 麦麸的单因素试验结果
由图3可以看出，在麦麸为60 g时培养基上菌丝长势最好，平菇中的硒元素含量也最高.另外平菇在麦麸低于40 g时营养不足，高于80 g时生长受到抑制。所以添加麦麸的最适范围是160-320 g/kg棉籽壳.
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