摘    要生长素响应因子(ARF)对植物的生长发育起着重要的作用，是一种能够调控生长素基因表达的转录因子。近年来，科学家通过对拟南芥ARF基因突变体的研究探究相关ARF基因的功能。CRISPR/Cas9是目前最新的基因组编辑技术，操作简单，准确率高。本实验主要对CRISPR/Cas9技术敲除的拟南芥ARF12基因敲除载体进行拟南芥的转化和筛选，为下一步研究AtARF12基因的功能做好准备。89144

Auxin response factors (ARFs) are important transcription factors, which play an important role in plant development。 In recent years, scientists explore ARF gene function through the ARF mutants in Arabidopsis thaliana。 CRISPR/Cas9 is the latest genome editing technology easy operation and high accuracy。 The experiment mainly focused on the transformation and selection the ARF12 knockout by CRISPR/Cas9 technology in Arabidopsis thaliana, preparing for the next study of AtARF12 gene function。源Y于U优I尔O论P文W网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201-8766

毕业论文 关键词：ARF12; 拟南芥; 转化; 筛选; CRISPR/Cas9

Keyword: ARF12;  Arabidopsis thaliana; Transformation; Selection; CRISPR/Cas9

目    录

1前言 4

1。1ARF基因 4

1。2CRISPR/Cas技术原理 4

2实验材料与仪器 5

2。1实验材料： 5

2。2实验仪器： 5

2。3实验所用配方及配置方法： 5

2实验方法 6

2。1拟南芥的培养 6

2。2拟南芥遗传来自优Q尔W论E文R网wWw.YouERw.com 加QQ75201.8766 转化 6

2。3 T1种子的筛选与培养 7

2。4。DNA水平的数据收集 7

2。4。1提取植物基因组DNA 7

2。4。2目的基因的扩增 7

2。4。3突变体阳性植株的检测 8

3结果与分析 8

3。1拟南芥的筛选 8

3。2突变体阳性植株检测 9

4展望 9

1前言

1。1ARF基因

生长素是植物的生长发育中起着重要作用的植物激素，参与调控植物茎的伸长，顶端优势的维持等生理过程。影响生长素的基因表达有内部和外部因素，除了光、温度、水分等外界环境的刺激外，内部因素对生长素的表达调控有着更加重要的作用，它们从生长素的信号转导方面调控生长素的基因表达的[1]，生长素响应因子(Auxin response factor,ARF)家族就是这样一种转录因子家族。生长素响应因子(ARF)植物的ARF由三个结构域组成，分别是DNA结构区DBD，二聚体结合区CTD，以及位于中间的起激活或抑制作用的中间结构区MR。ARF主要通过DNA结构区DBD与生长素响应基因启动子区域的生长素响应元件(AuxREs)TGTCTC 结合[2]，激活或抑制生长素响应基因的表达，从而调控植物的生长发育。ARF通常以家族的形式存在于植物体内，Ulmasov 等科学家在拟南芥中鉴定出了最早的ARF基因。目前科学家已在多种植物中发现了ARF家族，如水稻 Oryza sativa，高粱 Sorghum bicolor，玉米 Zea mays等植物[3-4]。近些年来，科学家们对于ARF的结构特征及其分布，在生长素信号转导途径中的作用、对生长素的调控机制方面有了较大的进展。论文网