酵母重组系统广谱质粒的构建(3)
1.3 应用
随着DNA整合方法的不断发展，使得人们能够在核苷酸级别操控达数的D片段，因此DNA的整合在生物工程中有着广泛的应用。
自然产物是我们日常医疗用药的主要来源，近50-70%的新批药都依赖于从自然中分离纯化的成分。甚至，有些时候，这些从自然界中直接获取的成分都不需要经过进一步的修饰或改造就可以直接使用。而这些自然产物都可以通过合成基因簇转入工程菌中进行大量表达，从而简化了分离纯化步骤，降低了生产成本。并且由于不同基因的启动子具有很强的特异性，因此，衍生出了诸如，如何实现大量高效的异源表达，如何使目的基因能够在发展成熟的工程菌中表达等问题。解决这些问题需要人们能够便捷的操控基因片段，如方便的更换相应的启动子，所以DNA整合方法的快速发展也推动了基因工程前进的步伐。除此之外，真核原核生物之间的复制子的复制起点也是不同的，因此DNA整合方法也能够应用于该领域。
1.4 pBBR1
pBBR1是一种能够在大肠杆菌等工程菌内进行复制的广谱复制子。其包含两个功能结构并且其转位子(transposons)序列与许多革兰氏阳性菌中的序列相同。其复制起点能够使酵母菌中构建的质粒在大肠杆菌中也能够复制。
2 实验过程及方法
2.1 实验目的
由于酵母细胞为真核细胞，因此，利用酵母细胞本身的DNA片段整合能力整合出的新的质粒并不能够在大肠杆菌这种常见的工程菌中进行复制。因此，本实验致力于构建能够在大肠杆菌等常见工程菌中复制表达的广谱质粒。并且通过对转化条件的调整，比较不同条件下酵母菌的转化能力。