根据现有文献资料考查，常山县青石镇低铺村和澄潭村是最早栽培常山胡柚的两个村。1983年常山县农业局进行常山胡柚资源调查时在常山县青石镇澄潭村发现1株树龄已达有75年的常山胡柚[7，8]。青石镇澄潭村这棵常山胡柚树是目前最古老的1株实生常山胡柚树，迄今（2016年）树龄已经达100多年，被称为常山胡柚的“祖宗树”（图1），衢州市林业局和常山县人民政府均将其列为古树名木。

图1 常山胡柚“祖宗树”

一般认为，常山胡柚是柚与酸橙或甜橙或宽皮橘天然杂交而成的，也不排除可能是多元杂交而成[9，10]。由于它是一个天然杂交种的实生后代，因而实生苗繁殖后造成个体间差异较大，特别是在果实的经济性状上表现良莠不一，差异明显。常山胡柚经多代繁殖后的果树，不易保存其母本的一些优良性状，未免优劣混杂，难于保持原有优良特性，所结果实出现味道不佳等情况。

有些果农常采用扦插繁殖，但扦插的繁殖速度较慢，成活率不高，难以适应常山胡柚生产发展的需要[11，12]。目前常山胡柚经多代繁殖后的果树，出现品种退化、品质变差、抗性降低等问题[13]。利用植物组织培养技术，在建立常山胡柚快速繁殖的技术体系，组培快速繁殖常山胡柚“祖宗树”，可以保护其优异的基因种质资源。

2 材料与方法

2。1实验材料

常山胡柚普通栽培品种和“祖宗树”的幼茎、幼叶、幼芽和幼果等不同的器官作为外植体，取自浙江常山县青石镇。此外还有次氯酸钠溶液、无菌水、洗洁精、蒸馏水、滤纸、MS培养基、酒精、植物激素6-BA等。

2。2 方法

2。2。1 外植体的选择

选择常山胡柚普通栽培品种的幼茎、幼叶、幼芽和幼果以及常山胡柚“祖宗树”的有果等不同的器官作为外植体。具体是，在胡柚的发芽期间，剪取获得胡柚幼茎、幼叶、幼芽。若无新芽，对胡柚进行打顶处理，经2周会长出新芽，经3-4周可获得适合实验的幼茎和幼叶。开花后3个月左右的幼果，直径大小在2-3 cm的幼果，剥出的幼胚大小在1-3 mm。

2。2。2 外植体的消毒过程

用经无菌水稀释5倍的次氯酸钠溶液（含有效氯100-140 g/L）处理胡柚材料，幼叶片处理5-10 min，幼茎处理10-15 min，幼芽根据幼嫩程度处理2-5 min。然后用无菌水将处理后的材料清洗3-5次，用滤纸吸干表面多余的水分。胡柚幼果用洗洁精洗净浸泡5分钟后，用蒸馏水冲洗干净，在超净台中，剥出幼胚，用稀释5倍的次氯酸钠溶液（含有效氯100-140 g/L）处理10 min，无菌水冲洗3-5次，用滤纸吸干表面多余的水分。

2。2。3 外植体的接种

在超净工作台上，将上述消毒后的外植体接种到不同组合的MS培养基，每瓶接种3-5个材料

2。2。4 外植体的培养文献综述

培养条件：温度22±2℃，光照1000-1200 lux。根据外植体的生长情况，每25-45天将材料转移到新的培养基上，并及时观察生长变化情况并拍照记录

3 实验结果

3。1 不同外植体的培养生长情况

每种因子实验接种20个外植体。培养基为MS添加不同浓度的植物激素。在每一种培养基上，每间隔30-50天，转接一次。具体结果如表1-4。

3。1。1 幼叶培养结果

常山胡柚普通栽培品种的幼叶培养后，在15天左右，少数叶片出现黄花死亡，部分叶片出现卷缩，进一步形成愈伤组织。