红色荧光蛋白mRuby2的优化表达(3)
1．2．3诱导培养后的低温处理
大肠杆菌里重组蛋白质表达后可能未能正确折叠。为增加蛋白质的正确折叠，将诱导表达培养细胞置于4℃冰箱低温保存，每隔一天进行荧光测定至第八天。
1. 2. 4 红色荧光蛋白mRuby2波峰值的确定
根据资料知道激发峰和发射峰分别是559 nm和600 nm。Tecan M200酶标仪扫描荧光强度要求激发波和发射波至少相差32nm或以上的要求，所以先进行步长2 nm初步扫描确定激发和发射波谱的大概情况，然后以波峰荧光值一半强度为范围确定它们的波长扫描范围，再进行步长1nm的再激发和发射波的扫描，确定准确的波峰位置进行单点荧光强度的测定。
Tecan M200酶标仪扫描用增溢70，闪光数10，酶标板选用Blok Transparent/Black。
1. 2. 5 数据分析
用SPSS软件进行荧光强度的方差和绘图。
2 结果与分析
2．1 重组表达载体的构建
用高保真加尾PCR扩增、限制酶切-连接的方法构建表达质粒pBMR(pRSETB/mRuby2)经过限制酶切、电泳初步验证后再经行测序验证构建的正确
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