近年来,随着测序技术的发展,可以利用基因表达谱挖掘重要的功能性基因,揭示优良性状的分子机制,还可以研究不同器官、不同环境胁迫下基因表达的差异在没有完整基因组序列的前提下,分析所有的mRNA转录本的丰度信息,发掘新的转录本,为开展不同生物功能基因组学研究提供了全新的思路(张召宝等, 2014; 费元等, 2015;吴燕等, 2016)。文献综述
另一方面,细胞色素P4502E1基因(cyp2e1)存在于哺乳动物肝细胞中,具有解毒功能。在2000年,美国华盛顿大学Doty教授实验室首次将细胞色素P4502E1基因(cyp2e1)转入到试验模式生物烟草中,结果显示转基因烟草可以更高效的吸收、分解苯系物等有机物污染;随后Doty课题组又将cyp2e1基因转入到杨树中,发现转基因杨树对环境中的三氯乙烯降解效率比野生型杨树高出了近百倍 (Doty SL et al, 2000; Doty SL et al, 2007)。我们实验室张道祥等人利用转基因矮牵牛高效清除空气中的苯、甲苯以及甲醛等污染物(Zhang DX et al, 2011),李佩菡等人利用转哺乳动物cyp2e1基因到烟草植株中,发现转基因烟草经苯处理后,植株体内NADPH-P450氧化还原酶以及细胞色素b5酶的活性显著提高(李佩菡等, 2012)。
本研究利用表达谱测序技术,分析转cyp2e1基因矮牵牛在甲醛胁迫下基因表达的差异,为解析植物代谢甲醛的机理提供理论基础。
1 材料与方法
1。1 材料论文网
矮牵牛(大学5号实验楼组培室),本研究是选择生长周期在8-9个周,生长状态相同的无菌组培苗。矮牵牛以及转cyp2e1基因(cyp2e1基因来源于哺乳类动物肝细胞)矮牵牛组培苗,均来源于本实验前期研究(Zhang DX et al, 2011;王嫚等, 2015; Wang M et al, 2015),并按照前期报道的条件进行组培繁殖。选择生长周期在8-9个周,生长状态相同的无菌组培苗。
1。2 RNA提取、纯化及测序文库的构建
先用15 mg/L的甲醛处理转cyp2e1基因矮牵牛24 h,放置于组织培养间(图1)。12 h白光处理,12 h黑暗处理。