1。1。3  白尾灰蜻Orthetrum albistylum Selys稚虫室内超纯水驯化处理

在恒温室内准备10只大小相同矩形塑料桶编号1-10，将180只白尾灰蜻稚虫平均且随机分养到10只矩形塑料桶中，分别向其中加入超纯水2L以及经过清洗和高温灭菌的石块与细沙（为白尾灰蜻稚虫提供必要的生存环境），每个矩形塑料桶中放入相同的氧气泵以提供氧气，食物来源为网上统一购买的红虫，每天早8点晚8点各投喂相同且足量的红虫防止白尾灰蜻稚虫自相残杀。蒸馏水每2天更换一次，总共处理时间为8天，使室外采集的稚虫能够适应实验室内环境并排出室外环境不同导致的后续实验误差。 

1。1。4 主要试剂论文网

1g/L的重铬酸钾K2Cr2O7母液；稚虫的超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase, SOD )活性测定采用亚硝酸盐法，过氧化氢酶(Catalase, CAT)活性测定采用钼酸铵法，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测定采用二硫代二销基苯甲酸法; 使用SOD试剂盒、CAT试剂盒、GSH-PX试剂盒试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1。2 试验方法

1。2。1  重铬酸钾（K2Cr2O7 ）对白尾灰蜻稚虫24h的半致死浓度(LD50)测定

“能杀死一半试验总体的有害物质、有毒物质或游离辐射的剂量”，在毒理学中被称为半数致死量（median lethal dose）简称LD50。查阅水虿六价铬离子半致死浓度文献可知约为10mg/L在6个干净的水箱中各放入10只大小相近的同种水虿将重铬酸钾母液稀释分别配制浓度为：6 mg/L，8mg/L，10mg/L，12 mg/L，14mg/L，16mg/L。在水箱中各加入2L配制好的K2Cr2O7溶液，提供白尾灰蜻稚虫必要生存条件，观察24小时死亡率约为50%的组别，确定K2Cr2O7对稚虫24h的半致死浓度(LD50)。

1。2。2  不同浓度六价铬对白尾灰蜻稚虫的染毒处理

根据国家污水综合排放标准(GB8978-1996)、中国生活饮用水水质标准（GB5749-85)和中国农田灌溉水质标准（GB5048-92)，六价铬最高允许排放值分别为为0。5mg/L、0。05mg/L和0。1mg/L(水作、旱作、蔬菜)；又根据改进的寇氏法[6]，测得 K2Cr2O7对白尾灰蜻稚虫24h的 LC50为10mg/L，设定实验组所用六价铬的浓度分别为 0 mg/L、0。05 mg/L、0。1 mg/L、0。5 mg/L和20 mg/L。每个浓度设置两个重复组，每组随机放入10只形态完整、大小相近的白尾灰蜻稚虫，每隔两天更换一次重铬酸钾溶液和细沙、碎石，每日投入足量食物两次。

1。2。3  不同浓度六价铬对白尾灰蜻稚虫SOD等解毒酶活力的影响

分别在处理的第3、6、9、12天对各组存活的稚虫随机选取2只，洗净后装入无菌管中贴上标签存于超低温冰箱中，待进一步处理及测定不同浓度的六价铬离子对稚虫SOD、CAT、GSH-PX酶活的影响。

过氧化氢酶（CAT）活力测定如下：其中试剂1-4均为CAT试剂盒内试剂

1）准确称取取1g组织，加入9倍体积的PBS缓冲液，在冰水浴中利用电动研磨棒研磨，制备匀浆。

2）在4℃，3000转/分，离心10分钟，取上清。

3）在1。5 mL EP管中添加试剂，其中对照管加入37℃预温的500μL试剂一和37℃预温的50μL试剂二，测定管加入25uL组织匀浆以及37℃预温的500μL试剂一和37℃预温的50μL试剂二。

4）混匀后，用离心机将混合体系离至EP管底部。

5）在37℃下，准确水浴60秒。

6）继续在1。5mL EP管中添加试剂，对照管中加入500uL试剂三和50uL试剂四，最后加入25uL组织匀浆，测定管中加入00uL试剂三和50uL试剂四，每个样品做2个重复。

7）混匀后，用离心机将混合体系离至EP管底部。

8）从EP管取200μL混合体系至酶标板中。