业已证实真核生物中 ，外部信号影响基因的转录涉及许多信号途径，cAMP-CREB/CREM 信号通路由腺苷酸环化酶(adenylcyclase，AC)催化产生cAMP， cAMP激活cAMP依赖蛋白激酶A (cAMP-dependent protein kinase，PKA)，后者磷酸化CREB和CREM中特定丝氨酸残基和(或)苏氨酸残基，而磷酸化的CREB/CREM与CREB结合蛋白(CREB binding protein，CBP)等结合，共同结合到靶基因的特定序列CRE，从而调节靶基因的转录[17]。CREM在体内广泛表达，但在睾丸组织的表达比其他任何组织高100倍[18]，CREM基因敲除纯合子小鼠表现为不育，睾丸生精小管直径减少20 %~30 %，完全缺少正常的精子发生波，未见精子细胞或精子，凋亡细胞显著增多，精子发生停止在减数分裂后的精子变态的第一步，减数分裂后的生精细胞特有的基因表达显著减少[19, 20]；精子发生停止在圆形精子阶段的患者其CREM基因表达明显减少、不表达或剪接错误导致产生不正确的产物[21]。CREB和CREM在生精周期不同时间呈不同程度阳性表达，磷酸化CREB在精原细胞呈明显阳性表达，在I-III期精母细胞呈中度阳性表达，在XII-IX期圆形和长形精子细胞则呈强阳性表达[22]；CREM在精母细胞和圆性精子细胞表达强于精原细胞和长型精子细胞[23]。研究已证实石蛇床子和高丽参等改善雄性大鼠生殖能力，增加精子生成与CREM基因及蛋白的表达增加有关[24-26]；睾丸扭转、精索静脉曲张等所致的生精细胞损伤伴有CREMτ基因及蛋白表达显著下调[27, 28]。现普遍认为在健康的睾丸中，FSH和LH是主要的细胞外调节因子，它们通过增加细胞内cAMP浓度引起PKA活化和触发转录因子如CREB和CREM的磷酸化而行驶调控作用[29, 30]。因此我们推测，纳米TiO2暴露后导致的血清FSH和LH浓度的下降、睾丸损伤、精子浓度的下降和睾丸特性基因表达的改变等可能与cAMP-CREB/CREM信号通路相关分子表达的改变有关。文献综述

基于上述事实，本文研究了纳米TiO2致睾丸损伤过程中cAMP-CREB/CREM通路的调控作用。本研究对于进一步揭示纳米TiO2的生殖毒性机制是至关重要的，并可能为防护纳米TiO2的生殖毒性提供理论指导。

2。 材料与方法

2。1化学物制备和表征

纳米TiO2（锐钛型）由苏州大学材料化学杨平教授制备并赠送。使用时，将纳米TiO2粉末悬浮于0。5%W/V HPMC溶液中，然后搅拌2-3min并在超声波下振荡15-20min使其充分分散。纳米TiO2颗粒（5mg/mL）悬浮在HPMC溶液中的粒径大小应为5-6nm，zeta电势分别为7。57mV和9。28mV[31]。