摘要：麸皮多糖是小麦麸皮中一种重要的大分子物质，是小麦膳食纤维的主要成分，具有很高的营养价值和抗氧化、抗肿瘤等活性。本课题以水提法从“淮麦 33”中提取麸皮多糖（WBR），以 WBR 刺激 RAW264。7 细胞建立体外炎症模型，研究麸皮多糖对巨噬细胞 NF-B 信号通路的影响。以半定量 RT-PCR 法检测细胞液中 TNF-、iNOS、COX-2 mRNA 的表达量；以 Western Blot 法检测 IB、p-IB、p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38 及核内 p-65、c-fos 水平；以荧光素报告基因检测 AP-1、NF-B 的活性。数据显示，WBR 可以上调相关炎症基因 mRNA 的表达水平，促进 AP-1 和 NF-B 的位移作用，提高 p38、IB 的磷酸化水平。 73733

毕业论文关键词：麸皮多糖，核转录因子 B，巨噬细胞，免疫调节

Abstract: Wheat bran polysaccharides is a kind of important macro-molecular material in wheat bran, and is the main component of wheat dietary fiber, with the high nutritional value and  anti-oxidation, and anti-tumor activities。 In this study, WBR which was extracted from “huai wheat 33”, was used to stimulate RAW264。7 cells and the inflammation model in vitro was set up, This study was aimed to investigate the bran polysaccharide on RAW264。7 cells NF-B signaling pathway。 Semi-quantitative RT-PCR was used to test the levels of mRNA expression of inflammatory mediators。 The levels of IB、p-IB、p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38 and actin were examined by western blot。 The activity of p-65 and c-fos were examined by Luciferase。 The result shows that WBR increased the mRNA expression of inflammatory genes in macrophages, the AP-1、NF-B displacement function and the level of phosphorylation of p-38 and IB。 

Key word: Wheat Bran Polysaccharides; NF-B; macrophage; immune regulation

目录

1 前言 6

1。1 麸皮多糖 6

1。1。1 麸皮多糖的药理作用 6

1。1。2  麸皮多糖的加工利用现状 6

1。2  炎症 6

1。2。1  炎症反应 6

1。2。2   巨噬细胞 7

1。3  多糖免疫调节的信号转导机制 7

2  材料与方法 7

2。1  材料与试剂 7

2。1。1  实验试剂 7

2。1。2  实验仪器 8

2。2  细胞培养及传代 8

2。3  RT-PCR检测 mRNA 表达水平 8

2。3。1  细胞总 RNA 的提取 8

2。3。2  PCR 扩增 9

2。4  Western Blot 测定促炎因子及通路蛋白表达 10

2。4。1  总蛋白的提取 10

2。4。2  核蛋白的提取 10

2。4。3  Western Blot 测总蛋白表达 10

2。4。4  Western Blot 测核蛋白表达 10

3  结果与分析 11

3。1   WBR 促进巨噬细胞炎症基因的 mRNA 的表达 11

3。2  WBR 对 RAW264。7 细胞 MAPK 及 IkB 磷酸化的影响