外源6-BA对不结球紫色白菜中花青苷抗氧化性及相关酶活性的调控作用(3)
细胞分裂素是一种重要的植物生长调节物质，能够调控植物的生长、发育和衰老过程[13]。近年来，有关植物衰老的研究备受关注。大量研究发现6-BA在一定程度上可延缓植物衰老过程，可使衰老阶段中的叶片保持较高的CAT活性、SOD水平，并减少丙二醛（MDA）积累，从而有效降低植物体内脂质的过氧化，阻止自由基的形成[14]，由此可知，6-BA是通过清除活性氧，进一步延缓植物衰老的。关于6-BA延缓叶片衰老的作用机制，有研究认为6-BA主要是通过提高植物体内抗氧化酶的活性缓解衰老过程产生的氧化损伤[15]。还有研究认为外源6-BA能有效降低衰老过程中叶片内活性氧（ROS）的含量，可能与6-BA直接清除氧自由基或阻止自由基的生成有关[16]。因此，探索外源6-BA对花青苷的抗氧化性的影响和相关酶活性的调控作用非常有科研价值。
1 材料与方法
1．1 试验材料
供试材料不结球白菜来源于南京农业大学白菜系统生物学实验室。选取苏州青和紫色叶自交系NJZX1-4为实验材料。将种子用蒸馏水冲洗干净，室温催芽3d左右，播种至穴盘并移至大棚温室。
1．2 试验方法
1．2．1 外源6-BA处理 待植株长到5叶期时，叶面喷施浓度为30 mg/L的6-BA溶液，并于喷前及喷后0 h，12 h，24 h，36 h，48 h，60 h和72 h取样，置-80℃保存备用，每个处理3个重复。为了增强植物吸收外源6-BA的效果，喷施液中加入0.04％的吐温80，再喷施清水加0.04％吐温80作对照（吐温80与清水的比例为1:1），喷施时间为17:00-18:00。
1．2．2 总花青苷含量测定 总花青苷的提取参照杨兆艳[17]的方法并略有改动。取冷冻干燥叶片0.1 g用液氮研磨后，加入1.5 mL 酸化甲醇 (1% HCl,w/v)，适当摇晃条件下室温浸提10 h提取液中花青苷见光易分解，试验过程中应注意避光。按下列公式计算花青苷含量：
花青苷含量= (A530-0.25A657)/W
其中A530 和A657 表示花青苷提取液分别在530 nm和657 nm下的吸光值，W表示叶片鲜重(g)。每个反应设3次重复。
1．2．3 总酚含量测定 总酚含量采用福林酚[18]的方法测定略有改动，具体如下：
取甲醇提取粗液1.6 mL，加入0.1 mL Folin-Ciocalteu 试剂（福林-西奥卡特试剂），混合均匀，室温静止6 min；加入0.6 mL 20 % Na2CO3，避光，在室温静止1 h，于760 nm 处测定其吸光度值A。试验重复三次。根据以上相同步骤，以没食子酸标品（GAE）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线y = 0.001x + 0.0188（R2 = 0.9951）。单位以mg GAE•100g-1 FW 表示。
1．2．4 抗氧化酶活性测定 与植物花青苷氧化反应的相关的氧化酶主要有多酚类氧化酶和过氧化物酶两类，还原性物质的存在可以一定程度上抑制花青苷的降解，过氧化物酶能够在适宜的条件下降解花青苷。