嗜（耐）酸性硫还原菌的分离鉴定及硫还原特性研究(2)
近些年来，通过硫酸盐还原菌（SRB）将硫酸盐还原成硫化氢，沉淀重金属成为一大趋势[11,12]。在微生物的作用下不仅能产生硫化氢去除重金属，还能调节出水的pH在碱性（反应1）。硫酸盐还原菌能处理酸性矿山废水（AMD）污染的地下和地表水[13]。但是硫酸盐还原菌在工程应用上也有一定的缺陷，嗜酸性不强，使用的有机碳源过高，并且在氧化还原过程中消耗不完全堆积，有毒害，并且出水COD会超标。有报道发现硫具有还原的可能性[14]，并且硫还原菌研究的历史短，国内外研究的学者并不多，菌的细节都没有展开比较详细的研究。故本课题在此研究背景的基础上，筛选出耐酸性硫还原菌（S0RB）将硫还原成硫化氢。硫还原菌相较于硫酸盐还原菌，还原所需电子是后者的四分之一，需要的成本更加低廉（反应2）[15]。利用氢气或有机质作为电子供体，硫作为电子受体的微生物分布在细菌和古菌界，并且绝大多数是噬热性的古菌,主要集中在热泉、浅滩和地下深海中等[14]，国内外也成功分离出了硫还原菌[16,17,18]。但是，与此同时，也存在一些问题，硫源的水溶性问题，普通硫粉的水溶性极低，导致硫还原菌的生长受阻[19]；硫还原菌绝大多数属于古菌域并且噬热性居多，为菌的筛选分离也造成了一定的难度。所以本课题的目的也是突破的难点之一是从工业污泥中成功分离出耐酸性硫还原菌，并从不同pH值(2.0-10.0)、不同温度(25℃-65℃)、不同电子供体（乙酸、丙酮酸等）方面来分析比较其硫还原特性。
1 材料与方法
1．1 实验材料和仪器
1．1．1 实验材料
①活性污泥：使用来自无锡芦村污水处理厂的污泥。
②试剂： 硫粉（AR），无机盐（AR），乙酸（AR）
③培养基类型及各成分：
培养基（g/L）：KH 2 PO 4（0.41）；NaHPO 4 •2H 2 O（0.53）；NH 4 Cl（0.3）； NaCl（0.3）； MgCl 6 H 2 O（0.1）；CaCl 2 •2 H 2 O（0.11）；酵母提取物（0.1）；酸微量元素（1mL）；碱微量元素（1mL）；文他命（0.2mL）[15]；硫粉（25mM）；乙酸（5mM）。
糖醇发酵培养基（g/L）：蛋白胨（2）；K 2 HPO 4（0.2）；NaCl（5）；糖（醇、糖苷）（1%） ；pH:6.8～7.0；溴百里酚蓝：1%水溶液3mL(先用少量的95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)。先调pH后再加指示剂。
淀粉水解培养基（g/L）：牛肉膏（5）；NaCl（5）；可溶性淀粉（5）；pH:7.2；碘试剂：称取分析纯碘片6.5g，放于小烧杯中，另外称取固体KI18.5g，并先把碘片溶解于少量酒精中，再加入水到100毫升，搅拌均匀即可。
V-P试验和甲基红试验培养基（g/L）：蛋白胨（5）；葡萄糖（5）；K 2 HPO 4（5）；pH:7.0～7.2。
脲酶试验培养基（g/L）：蛋白胨（1）；NaCl（5）；KH 2 PO 4 （2）；葡萄糖（1）；酚红（0.012）；pH：6.8～6.9。
吲哚培养基（g/L）：蛋白胨（1）；NaCl（0.5）；pH：7.8。
硫化氢培养基（g/L）：蛋白胨（10）；L-半胱氨酸（0.1）；Na 2 SO 4 （0.4）；pH：7.0-7.4
以上培养基在使用前均经过115℃高压灭菌20min。
1．1．2 实验仪器
实验器材如图1-2所示
图1-2 实验仪器设备
仪器名称 规格型号 生产厂家
隔水式电热恒温培养箱 PYX-DHS 上海市跃进医疗器械一厂
单人净化工作台 HJ-CJ-1D 上海苏净实业有限公司
蒸汽灭菌锅 YX-4502 上海三申医疗器械有限公司
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