应用蛋白质电泳技术检测杂交油菜种子的真实性和纯度(2)
种子品质的优劣是决定品种特征特性能否充分发挥的关键，而种子纯度则是衡量种子质量的重要指标。高产、稳产、优质的优良品种是农业增产和农民增收的前提，而杂种优势的利用是提高农作物产量和改良品种品质的重要途径。近年来，随着科学技术的进步和农业生产技术的深入发展,越来越多优良品种的出现为农业发展的优质高效做出了重大贡献。
油菜杂交种F1代的真实性和纯度直接关系着杂交油菜品质的优劣与产量的高低，既是衡量杂交油菜质量好坏的重要指标，同时也是申请新品种保护的主要指标。因油菜属于常异花授粉作物，所以在F1代杂交种的制种过程中容易有不育系微量花粉的自交种子的混入或者人为因素掺杂异品种种子。由此导致的油菜杂交种真实性变差、纯度降低无疑会给农业生产带来极大的损失。据科研人员研究表明，杂交种纯度每下降1％，产量将下降0.2％～0.4％[2]。与此同时，随着杂交油菜种植面积的逐年增大，假种子事件时有发生，种子纯度问题已成为杂交油菜种子生产过程和质量管理中最突出的问题之一，这不仅给农业生产带来不可弥补的损失，也严重地危害到了农民的切身利益。因此，我们必须要加强种子真实性和品种纯度鉴定[3]，以充分发挥杂交种的优势，同时减少假杂种带来的经济损失，为进一步发展油菜生产提供切实保障。
种子的鉴定技术包括形态鉴定法[4]、分子标记法[5]、电泳法[6]等，不同作物种子采取的鉴定技术也不尽相同。针对目前的研究报道，发现利用同工酶方法鉴定杂交油菜种子真实性和纯度的研究报道较多。蓝延英等发现，利用SDS-PAGE技术可以找出甘蓝型油菜杂交种及三系的酯酶同工酶谱带的差异[4]。陈松等的研究同样表明，利用酯酶同工酶鉴定油菜纯度的方法是可行的[5]。张亚兵等研究指出，同工酶鉴定种子纯度在种子检验中有实际应用价值[6]。梅德圣等对甘蓝型油菜“中油杂2号”杂交种及其父母本的酯酶同工酶分析结果显示，迁移率(Rf)为0.8的条带可作为特征带来进行杂种纯度鉴定，且酯酶同工酶鉴定与田间种植鉴定的结果相吻合[7]。近年来，由于生化分析和分子生物学技术的迅速发展，农作物品种鉴定和种子纯度检验方法取得了长足进步，已由外观形态观察逐步发展到生理生化水平和分子水平上的鉴定。
油菜种子的贮藏蛋白主要有谷蛋白、清蛋白和球蛋白三类，其中醇溶蛋白含量很少。油菜种子的贮藏蛋白具有较丰富的多态性，其多种分子形式在凝胶电泳时能够表现出蛋白质分子谱带的不同[8]。而我们能够将不同品种区分开来的依据是因为不同的杂交品种具有不同的谱带类型。本试验采用4个不同的杂交油菜品种，通过比较蛋白条带特异性来评估各品种纯度或质量，同时探究SDS-PAGE技术在杂交油菜种子真实性和品种纯度鉴定方面的可行性。
1 材料与方法
1．1 供试材料
本试验使用的四个油菜品种分别为：秦优1号、盐油杂3号、秦优198、沪油杂4号。
1．2 主要实验药品
丙烯酰胺，N,N,-甲叉丙烯酰胺，三羟甲基氨基甲烷（Tris), 四甲基乙二胺（TEMED），考马斯亮蓝G250，十二烷基硫酸钠（SDS），过硫酸铵（AP)，2-巯基乙醇（2-ME），甘氨酸（Glycine),溴酚蓝，蔗糖，甲醇，乙酸，硫酸铵，磷酸，琼脂粉（均为分析纯级）。
1. 3 SDS-PAGE电泳方法
1. 3. 1 试剂配置方法
表1 SDS-PAGE试剂配方
试剂名称
Name of reagent 配制方法
Prescription of reagent
30%单体贮备液 30 g丙烯酰胺，0.8 g N，N-甲叉丙烯酰胺，溶解后定容至100 mL，过滤，保存于4℃