产葡聚糖酶木霉菌株的筛选及酶活分析
毕业论文关键词：葡聚糖酶；木霉菌株；酶活
Screening The Trichoderma Viride Strains That Can Produce Glucanase And Enzyme Activity Analysis
Abstract: This experiment uses selective medium screened the high-yield strains of glucanase firstly. And then analyzes the carbon source, temperature, pH and early glucose concentrations in glucanase induction conditions respectively. The results show that the strains that can produce glucanase will produce a transparent circle around in turbid medium. When carbon source was 1% , the enzyme activity of glucanase is highest and the enzymatic activity is 13.158 U/mL. When temperature is 60℃, the enzyme activity of glucanase is highest and the enzymatic activity is 10.611 U/mL. When the pH value is 6 the enzymatic activity is the highest, and the enzymatic activity is 7.25 U/mL. When glucose concentration is 4%, the enzymatic activity is the highest, and the enzymatic activity is 14.368 U/mL.
Key words: Glucanase, Trichoderma Viride Strains, Enzyme Activity
目 录
摘 要 1
引言 1
1实验材料和方法 2
1.1 实验材料与试剂 3
1.2 实验仪器 3
1.3试验方法及过程 3
1.3.1高产葡聚糖酶木霉T-soybean的筛选 3
1.3.2不同因素对木霉T-soybean产葡聚糖酶的影响 3
1.3.3酶活的测定 4
1.3.4 SDS-PAGE电泳 7
2结果与分析 9
2.1产葡聚糖酶木霉的菌株的筛选 9
2.2碳源对葡聚糖酶的影响 9
2.3温度对葡聚糖酶的影响 10
2.4 pH值对葡聚糖酶的影响 11
2.5葡萄糖初浓度对产葡聚糖酶活力的影响 11
3讨论 12
参考文献 12
致谢 15
产葡聚糖酶木霉菌株的筛选及酶活分析
引言
β-1,3-葡聚糖是一类葡萄糖聚合物，是由β-1,3-糖苷键连接构成的葡萄糖聚合物，这类多糖存在于很多生物体内，特别是在真菌细胞壁中[1]。研究表明β-1,3-葡聚糖是一种良好的高效生物应答物，能有效的增强哺乳动物的免疫力，具有抗癌、抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫、降低胆固醇和血脂、促进伤口愈合等功能[2]。同时也是一种低热量的食品原料，能预防糖尿病、降低体重、控制肥胖病、防止心血管病和龋齿的发生[3]，此外β-1,3-葡聚糖还具有良好的持水性、保温、成膜和无刺激性等性质，能广泛应用于医疗、食品加工以及化妆品生产等行业中[4]，β-1,3-葡聚糖广泛的应用于啤酒工业中，我国是世界啤酒大国，已连续三年位居世界第一[5]。然而在啤酒酿造的过程中由于β-葡聚糖含量过高导致麦汁分离速度和浸出量降低[6]，在发酵过程中过量的β-葡聚糖还能影响啤酒过滤以及清晰度和泡沫持久力的等感官指标。β-葡聚糖酶应用于制糖业，β-葡聚糖酶可以大大的减少制糖过程中葡聚糖的形成，从而有效减少葡聚糖的浪费并且减少糖分的流失，可给葡聚糖生产工业减小很大的压力，取得了较好的效果[7]。β-葡聚糖酶应用于饲料工业中，在饲料中添加β-葡聚糖酶可以改善肠道内的微生物环境，提高肠道中酶的活力，从而有助于提高动物对饲料的吸收，提高饲料的利用率，同时也减少了排泄物对环境的污染[8]。但是因为β-1,3-葡聚糖的溶解性比较差，所以葡聚糖在提取和实际应用的过程中都受到了很大的限制[9]。针对这一问题，国内外学者试图通过改变该糖本身的性质的方法来增大它的溶解性。目前，对β-1,3-葡聚糖进行改性的方法主要有通过化学和用生物酶处理两种。其中化学在国内外研究中涉及比较广泛，如磺酞化、硫酸化、磷酸化和梭甲基化等[10]。此方法虽然能有效的增加β-1,3-葡聚糖的溶解性，但处理方式太过于剧烈，很容易改变β-1,3-葡聚糖的天然结构，从而导致β-1,3-葡聚糖的生物活性降低甚至改变，而酶处理时反应条件温和，不改变其结构，无毒并且安全，同时还有效的避免了使用酸碱和机械等方法破壁带来的污染、使抽提物失活等问题，令人遗憾的是到目前为止还几乎没有关于这方面的报道[11]。葡聚糖是一种生物活性强并且毒副作用很低的高效生物应答物，但是目前常采用的传统的碱法提取得到的β-1,3-葡聚糖水溶性差，使其应用受到了很大限制[12]。葡聚糖酶是一种内切酶，专一作用于β-葡聚糖的1-3及1-4糖苷键[13]，因此，用β-1,3-葡聚糖酶对β-1,3-葡聚糖进行处理将使其溶解性大大的增加，将极大地推动和拓宽其在医药、食品及化妆品等很多行业中的应用。因此，葡聚糖酶对于工业化生产具有很重要的意义，研究产葡聚糖酶木霉T-soybean菌株的筛选及酶活分析可增添高产葡聚糖酶菌及葡聚糖酶诱导产生提供理论依据。
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