单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism , SNP)会潜在的诱导或破坏miRNA与其靶位点的结合。目前,关于miRNA单核苷酸多态性研究分析的报道已不在少数。Giulia等检测到miR-96的一个点突变,可以降低miR-96前体发夹结构的稳定性,同时成熟miR-96合成降低,前体的水平未受影响,而当进行补偿性的突变恢复miR-96前体发夹结构时,成熟体miR-96的合成恢复,这说明突变抑制了前体的加工,原因可能是妨碍了Dicer酶裂解。此外,Landi等通过分析,在研究的104个与结肠癌相关的基因中发现了57个SNP,其中,CD86基因的C/G多态被发现是与捷克人群的结肠癌有直接关系的。 Sun与其同事开展了一个大规模的遗传分析实验,主要分析自然发生的miRNA多态性,他们认为一个单独的碱基改变,即使碱基改变的位置是在成熟miRNA序列以外,足可以影响该miRNA的产生和功能。Jeannette等也认为miRNA前体侧翼的突变也会引起一些生物学功能的改变。Yang等为了研究SNP与膀胱癌的关系,分析了41个miRNA发生相关蛋白的SNP位点,经过数据分析发现GEMIN3的AA型具有2.5倍于其他基因型的发病风险,不仅如此,由GEMIN4的启动子与内部的6个多态位点组成的一个单体型的发病风险亦是1.25倍于其他个体。除此之外,已有许多实验证明miRNA及其靶位点的多态性与乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌等癌症的发生、发展和预后有着十分紧密的关系。
    因此,本研究以徐淮山羊、波尔山羊和海门山羊等三个品种共计135个个体为材料,对山羊miR-668-3p、miR-767、miR-323a-3p、miR-665-3p、miR-541-3p、miR-411c-5p、miR-129-3p、let-7e、miR-29a、miR-424-5p、miR-432、miR-495-3p、NovelmiR-65、NovelmiR-67、NovelmiR-77、NovelmiR-47、NovelmiR-72、NovelmiR-84、NovelmiR-70的等19个基因序列的遗传变异进行了研究。
2 实验材料
2.1 实验动物及血样来源
本实验选用三个山羊品种,即徐淮山羊、波尔山羊及海门山羊各45只。徐淮山羊血样采集自徐州市铜山县吕梁乡羊场;波尔山羊采集自徐州市丰县梁寨合作种羊场,海门山羊采集自南通海门羊场。所有试验羊均为18月龄左右。
2.2 实验试剂
    普通试剂如:TE缓冲液;三羟甲基氨基甲烷(Tris•Cl)等;10×TBE缓冲液;0.5×TBE缓冲液;柠檬酸;柠檬酸钠;抗凝剂ACD;上样缓冲液;染色液;30% 丙烯酰胺;SSCP变性剂(10 mL);葡萄糖;10% APS(过硫酸铵);Taq DNA聚合酶;DNA抽提缓冲液;EB染色液;dNTPs;5 mol/L NaCl;10% SDS;NaAc缓冲液;DL2000 Marker;蛋白酶K;PBS缓冲液;0.5 mol/L EDTA;1 mol/L Tris•Cl。
2.3 仪器设备
    Eppendorf移液器系列;台式高速离心机;PCR仪;电泳仪;高速冷冻离心机;格兰仕微波炉;恒温循环器;电泳槽;脱色摇床;凝胶成像仪;紫外分光光度计;紫外分析仪;电子天平;自动三重纯水蒸馏器;超低温冰箱;普通冰箱;电热恒温水浴锅;电热恒温培养箱;超纯水仪;超声波清洗器。
3 试验方法
3.1 羊全血基因组DNA的提取
    方法参照孙家节2010硕士学位论文。
    提取好DNA之后,用NaNoDrop2000检测其浓度以及纯度,之后再进行琼脂糖凝胶电泳检测其条带是否清晰。若浓度或纯度太低,或者条带模糊,则DNA不宜使用,应重新提取。
3.2 PCR反应所需引物设计
本研究中所用到的所有引物都是使用Primer premier6.0软件自行设计,然后由上海生物工程有限公司合成。
上一篇:鸭PRKAB1基因多态性研究
下一篇:紫苏醛对白色念珠菌的细胞周期和细胞凋亡的影响

内生真菌对鹅观草生长的...

桑叶抑制酪氨酸酶活性的品种差异研究

不同瓜蒌品种不同挂果期...

水稻不同品种次生休眠特性的差异比较

徐州山地森林植物群落与...

斑马鱼LRRK2突变体中差异化...

亚洲棉司笃克氏棉及其体...

志愿者活动的调查问卷表

国内外图像分割技术研究现状

医院财务风险因素分析及管理措施【2367字】

神经外科重症监护病房患...

中国学术生态细节考察《...

承德市事业单位档案管理...

公寓空调设计任务书

AT89C52单片机的超声波测距...

10万元能开儿童乐园吗,我...

C#学校科研管理系统的设计