摘要实时荧光定量PCR的标准化对于精确获得基因表达数据很重要。最常见的反转录定量PCR的标准化是使用参照物，或者管家基因。然而，有越来越多的证据显示甚至是管家基因也会在不同情况下其表达量也会被调控。反转录定量PCR最近被用于基因表达研究的方面，并且没有被证实有成套的参照基因。我们的研究旨在于9个可能的斑马鱼发育进程中和特定组成的参照基因。所有9个参照基因展现了不同的表达情况。β-actin，EF1α和Rpli3α基因组成了一个被证实的参照基因组用来研究斑马鱼发育时间进程。EF1α, Rpli3α 和 18S rRNA基因更适合作为斑马鱼组织分析研究。在本次研究中采用了EF1α和Rpli3α这两个参照基因为参照物，研究了在不同双氧水浓度（氧化压力不同）的情况下HSP基因表达量的变化，使得RNA Sequencing的结果得以证实。76544

实验结果表明：在相同的培养条件下，HSP基因在1。25mmol双氧水处理后在突变体中有明显的上升。这一结果在用两种参照基因计算的情况下是一致的。特别是在用EF1α计算的情况下，1。25mmol的HSP基因表达量基本达到了0mmol组的2倍以上

Abstract The normalization of qRT-PCR is relatively important for gaining precise statistics。 The standardization of the most common quantitative reverse transcription PCR is the use of reference, or housekeeping genes。 However, there are more and more evidence shows that even the expression quantity of the housekeeping genes in different cases will also be regulated。 Quantitative reverse transcription PCR has been used in the study of gene expression ways, and there is no proven a set of reference genes。 Our research aims to nine possible reference of zebrafish development process and specific genes。 All 9 reference genes show different expression quantity。 Betaactin, EF1 alpha and Rpli3 alpha gene formed a proven set of reference genes are used to study zebrafish development timeline。 EF1 alpha, Rpli3 alpha and 18s ribosomal RNA gene are more suitable for as zebrafish organization analysis。 In this study we adopted EF1 alpha and Rpli3 alpha as reference。 Studied in the different concentration of hydrogen peroxide oxidation (pressure), the quantity of HSP gene expression under the condition of the RNA Sequencing results confirmed。

Experimental results show that under the condition of the same culture, HSP gene tendency for hydrogen peroxide in 1。25 after treatment had obvious rise in the mutant。 The results in the case of with several reference genes calculation are consistent。 Especially in the case of using EF1 alpha to calculate。 Basically the expression amount of 1。25mM mutants reached more than 2 times as the amount of 0mM wild types。

毕业论文关键词：斑马鱼； LRRK2； HSP 基因； 参照基因； 荧光定量反转录PCR

Key words:  Zebrafish； LRRK2； HSP gene； reference gene； qRT-PCR 

目录

目录 4

引言 5

1 材料与方法 5

1。1  实验材料 5

1。2  实验方法 5

1。1。1 野生型和突变体的胚胎获取 5

1。2。2 RNA提取与质量分析 5

1。2。3 参照基因的选择 6

1。2。4 RT-PCR与荧光定量反转录PCR 6

2  结果与分析 6

2。1不同批次的RNA质量对实验的影响 8

2。2参照基因的选择