1  材料与方法  1.1  材料 1.1.1  供试菌株 来自实验室保藏的一批初筛菌株,需进一步分离、纯化与鉴定。
1.1.2  供试矿物 选取黑云母作为供试矿物(元素组成见附表1) ,经粉碎、研磨后收集100~300 目之间的颗粒,用超声波清洗,在 pH 为4.0 的盐酸溶液中浸泡过夜,再用去离子水清洗若干次,直至溶液澄清并且 pH达到7.0,烘干备用。 1.1.3  培养基   LB培养基: 10g 胰蛋白胨, 5g 酵母粉, 10g NaCl, 1L蒸馏水,调 pH 值至 7.0, 121℃,灭菌25min(配制固体培养基时,加琼脂20g) 。 BHm培养基:0.02gKCl,0.15gMgSO4•7H2O,0.08gNaH2PO4•2H2O,0.09gNa2HPO4•12H2O,0.065g(NH4)2SO4,0.1gKNO3,0.02gCaCl2,2.0g葡萄糖,1L蒸馏水;调pH至7.0,115℃,灭菌30min。 1.1.4  主要试剂 (1)氯仿/异戊醇(24:1):将氯仿和异戊醇按照体积比24:1 混合 (2)1%的琼脂糖凝胶:取 2mL50*TAE加98mL去离子水先稀释成1*TAE,再加1g琼脂糖 (3)0.85%生理盐水:准确称取 0.85gNaCl,溶于100mL去离子水中 (4)6N H2SO4:166ml浓硫酸缓缓加到 800ml 去离子水中,稀释至1L (5)0.6N H2SO4:16.6ml 浓硫酸缓缓加到800ml去离子水中,稀释至 1L (6)5%钼酸铵:准确称取 5g 钼酸铵,溶于100mL 去离子水中 (7)5%草酸:准确称取 5g草酸,溶于100mL去离子水中 (8)5%抗坏血酸:5g抗坏血酸溶于100ml 6N H2SO4溶液中(现配现用) (9)铝试剂缓冲液(pH 3.9):120mL冰醋酸用纯水稀释至 800mL,加NaOH10.5g,铝试剂0.35g,溶解后调 pH值至3.9 (10) 乙酸-乙酸钠缓冲液:称取13.5g乙酸钠加入12ml冰乙酸,加水后溶解稀释至500ml (11)1%盐酸羟胺:准确称取1g盐酸羟胺,溶于 100mL 去离子水中 (12) 0.1%邻菲罗啉:准确称取0.1g 的邻菲罗啉,先用少量乙醇溶解固体,再溶于 100mL去离子水中 (13)pH 为6.4 的柠檬酸缓冲液:将 0.1M柠檬酸与0.1M柠檬酸钠以1:9 混匀 (14)茚三酮显色液:称取 0.5g茚三酮、0.3g果糖,溶于100mL 去离子水中,避光低温保存 (15)氯仿:正丁醇(5:2):将两者按照体积比混匀 (16)0.1mg/mL的葡萄糖母液:准确称取 10mg 葡萄糖,溶于100mL 去离子水中(17)90%苯酚溶液:90g苯酚溶于10mL去离子水中,室温可保存数月 (18)9%苯酚溶液:90%苯酚溶液稀释10 倍,现配现用
1.2  方法
1.2.1  可培养细菌的分离、纯化 将供试菌株用液体LB培养基活化2~3 次以后,于固体 LB培养基的平板上进行平板划线,并于30℃培养箱中倒置培养;纯化三次以后,待菌落刚长出时,即将平板倒置于4℃冰箱中保存待用。
1.2.2  供试菌株的分子鉴定 I.  细菌基因组DNA 的提取(高盐法) 将纯化后得到的菌株用 LB 培养基活化,高盐法提取细菌基因组总 DNA。 (1)菌体收集 取1ml菌悬液离心(6000rpm,5min) ,弃上清;沉淀重悬于550μL 1*TE缓冲液中。 (2)细胞破碎 加10mg/mL 溶菌酶10μL,37℃水浴2-4h。  (3)破坏蛋白,释放核酸 加50μL 20% SDS 和8μL 20mg/mL的蛋白酶 K,颠倒混匀,65℃水浴 2h,每隔15- 30min轻轻颠倒几下。 (4)DNA存在于NaCl溶液水相中 加200μL 5mol/L NaCl,上下颠倒15 次,离心(12000rpm,10min)取上清,移入新管(注意不要取到下面的沉淀)。 (5)抽提DNA,进一步去除蛋白 上清与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混匀,离心(12000rpm,10min) ,取上清,移入新管(注意不要吸到中间的蛋白质层) 。 (6)重复上述操作一次  (7)向上清加入0.6 倍体积的异丙醇,于 4℃静置0.5h,离心(12000rpm,10min) ,收集核酸沉淀。  (8)用预冷70%乙醇洗涤沉淀二次,离心(12000rpm,10min) ,弃上清,室温吹干;重溶于30μL 超纯水中,贮存备用。电泳检测是否成功提取细菌基因组总DNA。 
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