天然防腐剂纳他霉素对黄曲霉的形态学影响(2)
1 实验材料与仪器
1.1 主要实验材料
新鲜马铃薯、纳他霉素、黄曲霉菌、琼脂粉、蔗糖、无菌水、蒸馏水、乙醇。
2 实验方法
2.1 土豆培养基的制备
将土豆洗干净去皮切成小块状，用电子天平称取200 g放到加有蒸馏水的500 mL规格的烧杯中待水沸腾后计时30 min，之后用8层纱布过滤并将土豆泥挤压以将其养分彻底挤出。另取一加有蔗糖16 g琼脂粉16 g的1000 mL的烧杯，将过滤液倒入其中用蒸馏水定容至800 mL，放到电热炉上加热使其固体融化达到液体内溶质均匀一致。再用量筒量取体积依次为100，92，84，76，68，60 mL的溶液，并倒入有1至6个相应编号的100 mL的锥形瓶中，最后放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌（灭菌锅上限温度设定为121℃定时为30 min）。
2.2 菌悬液的制备
2.2.1菌种的活化
在洁净工作台下操作，用灭菌过的接种环挑取少许菌种后迅速伸入灭菌过的装有斜面固体培养基的试管内，在斜面上轻轻划线，塞上试管塞后在22 ℃恒温培养箱内培养24 h。
2.2.2菌悬液的制备
将活化的菌种接种到液体培养基中，使菌体在液体培养基中均匀分布。放入22 ℃，170 r/min培养箱培养24 h，用平板计数法确定菌悬液初始浓度，再以蒸馏水10倍稀释达到实验用菌悬液的浓度。菌悬液应保存在4 ℃冰箱内供短期内使用。
2.3 药品制备、倒平板、接种以及封口培养
2.3.1药品制备
称取10mg纳他霉素药品放入体积为200mL温度为80℃的无菌水中用玻璃棒搅匀，再将制好的药品液体加入液体培养基中，使每个的体积均为100mL。
2.3.2倒平板
把放在热干燥箱中的培养皿取出，分成2组，每组5个培养皿。用配好的液体培养基在酒精灯的周围缓慢的倒入培养皿中，每个皿中倒50mL，而且倒前要充分摇匀以防药品沉淀而影响实验结果。
2.3.3接种
待液体培养基凝固之后再进行，将移液枪刻度调至10吸取稀释倍数为100倍的菌悬液打入培养基中，用在火焰上烤过放凉的涂布棒轻轻的在培养基表面将菌液向四周涂去，接种过程中要严格按实验要求操作，(即枪头要事先灭好菌，为了避免误差，每次吸取液体后均需更换枪头。用涂布棒进行涂布培养时，每涂布完成之后，均需要将涂布棒放在酒精灯火焰上灭菌)使其均匀分布在皿内。
2.3.4封口并记号
用剪刀剪取合适长度的封口膜条沿着培养皿的开口处封口，不留一丝缝隙。之后用记号笔在每个培养皿上标好药品的浓度以便后期观察记录的方便。
3 结果与分析
各个皿中的菌落体积较小且为透明，虽然能看到但不是很明显。1至3号皿中可观察到，4号不是特别容易看清，而5、6号还没有长出。