甲基托布津降解菌的选育及鉴定(3)
葡萄糖粉 AR. 河南百创生物科技有限公司
明胶粉 95% 苏州臻豪化工科技有限公司
蔗糖 99% 郑州天健科技有限公司
表2.主要试验仪器
Table2. The test instrument
名称 型号 生产厂商
电子天平 AR124CN 上海奥豪仪器有限公司
恒温培养摇床 ZHWY 南京晓晓仪器设备有限公司
恒温培养箱 LRH系列 北湖仪器设备有限公司
洁净工作台 SW-CJ-FD 深圳市公明百净机电设备厂
高压蒸汽灭菌锅 LDZX 特斯特检测仪器公司
离心机 HC-3018 张家港市离心机制造厂
紫外分光光度计 TU-1810 长沙秋龙仪器有限公司
1.2 土壤样本采集
于2015年3月下旬，在周口市川汇区施用过甲基硫菌灵的蔬菜园中，采集距离地表约15厘米的土壤样本5份，放入环保纸袋中，编号标注时间、地点。筛除非土壤成分后将样品装入棕色瓶中并标记，放入4℃冷藏箱保存备用。
1.3 培养基配制
基础盐培养基（MSM）：（NH4）2SO4 1.0g，MgSO4•7H2O 0.2g，NaCl 0.4g， NH4NO3 1.0 g，蒸馏水1L。
LB培养基：蛋白胨5.0g，酵母提取物2.5g，氯化钠2.5g，蒸馏水500L。
生理生化试参考文献[22]方法。
以上培养基在使用前须经过121℃或115℃（灭菌温度视具体培养基而定）20min灭菌。
1.4菌种分离与纯化
从5份土壤样品中各称取5g土壤，分别加入到100mL中含甲基托布津100mg/L的无机盐培养基，编号并注明时间。将5份培养液放入35℃、120r/min的恒温培养摇床中培养3d，培养结束后按10%的接种量接种到新鲜配置的无机盐培养基中，并逐步加大甲基托布津的用量直到每份含量为500mg/L停止。
将5份驯化后的培养液用平板划线法接种到LB固体培养基上并分别做一组平行对照，放入35℃生化培养箱中培养24h后发现有3份长出菌株，其余两份没有任何菌株生成。把这3份菌株分别命名为ZY01、ZY02、ZY03，并用斜面保存法于4℃冰箱中保存菌种，标明编号、日期。