ium verticillioides）是植物病原菌中一种重要的丝状真菌，会造成多种植物的茎、穗腐烂，尤其是对玉米的危害极其严重，是玉米茎、穗腐病的优势种群。其分泌的毒素伏马毒素（Fumonisin,FB）对人和动物都有极为严重的危害。作为一种重要的表观遗传学调控机制，组蛋白甲基化修饰在多种生命过程中发挥了重要的作用。有研究表明，H3K4甲基化调控丝状真菌中毒素合成，但轮枝镰孢菌中重要毒素伏马毒素（FB1）如何受到组蛋白甲基化水平调控尚不清楚。在本研究中，我们鉴定了轮枝镰孢菌中编码H3K4甲基转移酶的FvSet1。为了阐明FvSet1的生物合成特点，我们构建了FvSet1缺失突变体。表型分析显示，FvSet1在真菌生长、环境胁迫、致病力及FB1的生物合成中起关键作用。82405

关键词：轮枝镰孢菌；FvSet1；甲基化修饰；伏马毒素

Study on Regulation Mechanism of FvSet1 of          Fusarium verticillioides to Fumonisin

Abstract： Fusarium verticillioides is an important plant pathogens,belonging to filamentous fungi, The pathogen can cause a variety of plant stems and spike rot,especially the harm to corn is extremely serious。Fusarium verticillioides can secret mycotoxin fumonisins that have serious harm to humans and animals。As an important epigenetic regulatory mechanism,histone methylation plays an important role in a variety of life processes。 Studies have shown that H3K4 methylation regulates the synthesis of toxins in filamentous fungi, but it is unclear how the important toxin FB1 in Fusarium verticillioides is regulated by histone methylation levels。 In this study, we identified FvSet1 encoding H3K4 methyltransferase in Fusarium verticillioides。 To elucidate the biosynthetic characteristics of FvSet1,we constructed FvSet1 deletion mutants。 Phenotypic analysis showed that FvSet1 played a key role in fungal growth, environmental stress, pathogenicity and biosynthesis of FB1。

 Key words: Fusarium verticillioides;FvSet1;Methylation modification;Fumonisin

目  录

摘要1

关键词1

Abstract1

Key words1

引言1

1材料2

1。1真菌菌株、生长条件及保存2

1。1。1菌株2

1。1。2菌株生长条件2

1。2。培养基及抗生素2

1。2。1培养基2

1。2。2抗生素4

1。3实验试剂及器材4

1。3。1实验试剂4

1。3。2实验器材4

2方法4

2。1 FvSet1的敲除载体构建4

2。1。1同源臂的扩增4

2。1。2 PEG介导的轮枝镰孢菌原生质转化5

2。1。3钢珠法小量粗提基因组DNA5

2。2 FvSet1的回补载体构建5

2。2。1引物设计与合成5

2。2。2扩增片段及鉴定5

2。2。3切胶回收6

2。2。4酵母转化及鉴定6

2。2。5酵母质粒提取7

2。2。6大肠杆菌转化及鉴定7

2。2。7摇菌及保存7

2。3表型分析7

2。3。1∆FvSet1对玉米粒和玉米茎秆的致病性测定7

2。3。2∆FvSet1对轮枝镰孢菌生长的影响8

2。3。3∆FvSet1对外界环境胁迫因子的敏感性反应8

2。4FB1含量测定8

3结果与分析8

3。1FvSet1在轮枝镰孢菌中的生物信息学分析8

3。2 FvSet1的敲除和回补载体的构建8

3。3表型分析8

3。3。1 ∆FvSet1对玉米粒和玉米茎秆的致病性测定8

3。3。2 ∆FvSet1对轮枝镰孢菌生长的影响9

3。3。3 ∆FvSet1对外界环境胁迫因子的敏感性反应9

3。4 FvSet1对FB1的生物合成是必不可少的10

2。2。7摇菌及保存10

4讨论 10

参考文献12

致谢13