在本研究中,我们确定了编码H3K4甲基转移酶的FvSet1。为了阐明FvSet1的生物学功能,我们构建了FvSet1缺失突变体。表型分析显示在轮枝镰孢菌中,FvSet1在FB1的合成,真菌生长和致病力以及环境胁迫反应中起关键作用。此外,在目前的研究中发现FvSet1调控了FB1合成关键基因(FUM)的表达水平。这些发现让我们对轮枝镰孢菌中FB1的调控有一个更清楚的了解。

1  材料

1.1  真菌菌株、生长条件及保存

1.1.1  菌株

野生型菌株:Fv102、FvSet1、缺失突变体:∆FvSet1、回补菌株:∆FvSet1-C

1.1.2  菌株生长条件

25℃下在固体CM、PDA和MM培养基下用于菌丝体生长。

1.2  培养基及抗生素

1。2。1培养基

(1)完全培养基(CM)(1000mL)         

Glucose(葡萄糖)               10 g

Peptone(蛋白胨)               2 g

Yeast extract(酵母提取物)       1 g

Casamino acids(酪蛋白氨基酸)   1 g

20×Nitrate salts(硝酸盐)        50mL

1000×Trace elements(微量元素)  1mL

1000×Vitamins(维生素)         1mL

  Agar (琼脂)                  12-15 g

定量称取上述物质于量筒中,加纯水搅拌至完全溶解,定容至1000mL。用PH计调pH调至7,分装至锥形瓶,之后用封口膜封口。在高温高压条件(121℃,110kPa)下灭菌20 min。

20×Nitrate salts  (1000mL)

NaNO3         120g

KCl            10。4g

MgSO4·7H2O    10。4g

KH2PO4        30。4g

定量称取上述物质于量筒中,加纯水搅拌至完全溶解,定容至1000mL。

(2)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)(1000mL) 

Potato(马铃薯) 200 g

Glucose(葡萄糖)    20 g

Agar  (琼脂)      10g

将马铃薯洗净去皮切成小块,称取200g,加水煮烂(水沸腾后20-30min,能被玻璃棒戳破即可),用八层纱布过滤,加入葡萄糖,加水搅拌混匀,定容至1000mL。分装至锥形瓶,之后用封口膜封口。在高温高压条件(121 ℃,110kPa)下灭菌20 min。

(3)基本培养基(MM)(1000mL)

KCl          0。5g

KH2PO4        1g

NaNO3        2g

MgSO4·7H2O        0。5g

FeSO4·7H2O     0。01g

Sucrose(蔗糖)     30g

                       Agar(琼脂)       12g

定量称取上述物质于量筒中,加纯水搅拌至完全溶解,定容至1000mL。用PH计调pH调至6。9,每升再加200μl Trace elements混合液。分装至锥形瓶,之后用封口膜封口。在高温高压条件(121℃,110kPa)下灭菌20 min。

(4)LB培养基(1000mL)

Tryptone(胰蛋白胨)           10g

Yeast extract(酵母提取物)       5g

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