在本研究中,我们确定了编码H3K4甲基转移酶的FvSet1。为了阐明FvSet1的生物学功能,我们构建了FvSet1缺失突变体。表型分析显示在轮枝镰孢菌中,FvSet1在FB1的合成,真菌生长和致病力以及环境胁迫反应中起关键作用。此外,在目前的研究中发现FvSet1调控了FB1合成关键基因(FUM)的表达水平。这些发现让我们对轮枝镰孢菌中FB1的调控有一个更清楚的了解。
1 材料
1.1 真菌菌株、生长条件及保存
1.1.1 菌株
野生型菌株:Fv102、FvSet1、缺失突变体:∆FvSet1、回补菌株:∆FvSet1-C
1.1.2 菌株生长条件
25℃下在固体CM、PDA和MM培养基下用于菌丝体生长。
1.2 培养基及抗生素
1。2。1培养基
(1)完全培养基(CM)(1000mL)
Glucose(葡萄糖) 10 g
Peptone(蛋白胨) 2 g
Yeast extract(酵母提取物) 1 g
Casamino acids(酪蛋白氨基酸) 1 g
20×Nitrate salts(硝酸盐) 50mL
1000×Trace elements(微量元素) 1mL
1000×Vitamins(维生素) 1mL
Agar (琼脂) 12-15 g
定量称取上述物质于量筒中,加纯水搅拌至完全溶解,定容至1000mL。用PH计调pH调至7,分装至锥形瓶,之后用封口膜封口。在高温高压条件(121℃,110kPa)下灭菌20 min。
20×Nitrate salts (1000mL)
NaNO3 120g
KCl 10。4g
MgSO4·7H2O 10。4g
KH2PO4 30。4g
定量称取上述物质于量筒中,加纯水搅拌至完全溶解,定容至1000mL。
(2)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)(1000mL)
Potato(马铃薯) 200 g
Glucose(葡萄糖) 20 g
Agar (琼脂) 10g
将马铃薯洗净去皮切成小块,称取200g,加水煮烂(水沸腾后20-30min,能被玻璃棒戳破即可),用八层纱布过滤,加入葡萄糖,加水搅拌混匀,定容至1000mL。分装至锥形瓶,之后用封口膜封口。在高温高压条件(121 ℃,110kPa)下灭菌20 min。
(3)基本培养基(MM)(1000mL)
KCl 0。5g
KH2PO4 1g
NaNO3 2g
MgSO4·7H2O 0。5g
FeSO4·7H2O 0。01g
Sucrose(蔗糖) 30g
Agar(琼脂) 12g
定量称取上述物质于量筒中,加纯水搅拌至完全溶解,定容至1000mL。用PH计调pH调至6。9,每升再加200μl Trace elements混合液。分装至锥形瓶,之后用封口膜封口。在高温高压条件(121℃,110kPa)下灭菌20 min。
(4)LB培养基(1000mL)
Tryptone(胰蛋白胨) 10g
Yeast extract(酵母提取物) 5g