摘要植物体内的甲基化水的降低或升高，会引起植物基因组内活性基因表达水平的变化。RNA沉默或RNA干涉（RNAi）是指某些极短的dsRNA可以特异地阻断体内特定基因表达，这既是针对外源基因，同样对于内源基因的表达也可以进行沉默，从而出现相应表型，这是在高等动植物体内都会产生的细胞水平防御机制。植物双生病毒必须依靠寄主植物的DNA复制系统来进行自我复制，它可主动通过对寄主细胞周期的调节而实现寄主细胞复制系统进入高活性水平， 在这一过程中，寄主细胞的全基因组甲基化抑制水平降低。为了解植物双生病毒ACMV对植物体内甲基化调控途径及植物本身的甲基化防御机制作用途径，我们构建植物甲基化（RdDM）途径中几个主要酶RDR6、DRM2、H3的干涉及过表达的转基因本氏烟植株，通过在相应的转基因植株上接种ACMV病毒的侵染性克隆，然后通过对发病症状、发病时间、发病率的观察记录，比较与野生型的表型差异，在此基础上，进一步对发病的植株进行病毒复制量进行定量检测，来分析相应的转基因植物内源RdDM基因的表达水平变化与病毒表型、复制之间的关系，从而了解植物双生病毒与植物甲基化防御途径之间的互作。76640

毕业论文关键词： ACMV病毒；基因的过表达；基因的干涉；甲基化；

Abstract：Gene expression can be turned on and off by decreased or increased methylation level of plant genome。 RNA silence or RNA interferce can induce efficient sequence-specific silence of endogenous or exogenous gene expression, silenced endogenous gene would relate a corresponding phenotype, which is the cellual level defense mechanism that can be produced in advanced plant and animals。 Replication of geminivirus DNA dependent on host plants, it can initiatively reprogram host cellular replicate system from a quiescent state to S-phase so that viral replication can occur。 In this stage people found a decrease of whole genome methylation level。 In order to understand the methylation regulation pathway of geminivirus in plant, we constructed interference and over-expression transgenic N。 benthamiana plants of RDR6、DRM2、H3, several major enzymes of plants methylation (RdDM) way。 By inoculation on these transgenic plants with ACMV virus, and record the differences of symptom occurring, compared with the wild type。  quantitative analysis of different phenotype would accelerate the understanding the interaction between geminivirus invading and plant defense mechanism。

Keyword: African cassava mosaic virus (ACMV); Over-expression; RNA-interference; methylation

目录：

摘要 1

Abstract： 2

引言： 5

第一章 材料与方法 6

1。1 试剂与材料 6

1。1。1 种子与质粒 6

1。1。2 受体植物 6

1。1。3 所需引物 6

1。1。4 常见的缩写 6

1。1。5 实验仪器 6

1。2 实验的方法 7

1。2。1 野生型本氏烟植株总DNA的提取 7

1。2。2定量 PCR技术 7

1。2。3琼脂糖凝胶电泳 8

1。2。4 病毒质粒的培养 8

1。2。5 病毒质粒PCR 9

1。2。6 热击转化法