苦参提取液对小麦条锈病菌的抑菌作用(2)
对于小麦条锈病的发生起着决定性作用的是条形柄锈菌菌源与菌量。小麦条形柄锈菌一般发生叶片、叶鞘茎秆，还有就是穗部。初期小麦叶片的发病特征：首先可以观察到褪绿斑，下一步出现黄色夏孢子堆形状呈长椭圆形，最后产生黑色的孢状冬孢子堆[8] 。小麦在抽穗、灌浆期最容易发生条锈病感染且发病较重，在小麦杨花到灌浆这个时期，小麦的千粒重及产量损失率与条锈病的病情指数有显著相关性的是，在试验测定中可以作为衡量的指标之一[11]。
随着环境的不断变化我们发现，小麦条锈病菌种类也在不断更新，使得生产中危害呈现越来越严重的态势，现在就有新的生理小种和致病类型。当前在小麦生产中最主要的防治措施是使用化学类药剂，这些化学药剂对小麦条锈病一般都具有良好的防效、促进增产作用[2]。但是，随着大量化学药剂的频繁使用，病菌已明显具有相当强抗药能力，尤为严重的是污染生活环境，比如：土壤与水中有相当的农药残留，从而不能长期使用。不然，不仅达不到预期的防治效果，而且会对人们的身体健康与生活环境构成严重威胁。鉴于对防治小麦条锈病越来越需要，寻找和开发新的无环境污染效果好的“绿色农药”尤为受到重视。基于对小麦病害防治的需要，本实验研究了苦参提取液对小麦条锈病菌活性的抗性作用，希望开发出更符合环境的试剂从而应用于大田生产[1]。
1.材料与方法
1.1试验时间及地点
试验于2015年3月10日开始，在周口师范学院生命科学与农学学实验室进行，分为室内饱子萌发试验和小麦幼苗试验，供试小麦品种为易感条锈病品种，本实验于2015年5月20日结束。
1.2材料
苦参；试验对照试剂为25%百里通化学药剂；小麦条锈菌菌种为从周口农科院试验田小麦病株采取的混合菌种，在学院实验室中分离纯化所得；小麦种子；配置PDA培养基的药品；其他试剂均为分析纯。以上实验材料均有周口师范学院生命科学与农学学院提供。
试验仪器:超净工作台；生化培养箱；全自动高压灭菌锅；电子天平
1.3试验方法
1.3.1苦参提取液的制备[1]
称取苦参100g研磨成粉后加水煮沸1.5h，过滤后留得药液。把过滤后的药液反复沉淀3次，收集药液。然后进行离心：3 000r/min，5min，得上清液。最后把药液减压浓缩至50mL左右，倒在锥形瓶中，于40C冰箱冷藏备用。
1.3.2室内孢子萌发试验
在试验田中收集患病的小麦叶片，清洗干净后用灭菌的剪刀将收集好患病叶片剪成小块放入盛有用95% 乙醇溶液的烧杯中浸泡10min后取出。然后再用无菌水浸泡20min，把倒掉无菌水后的烧杯放入超净工作台备用。打开紫外线和超净工作台上的通气口30min后正式操作试验。首先将灭菌的PDA培养基加热融化，倒入灭菌的培养皿中。然后用移液管将浸泡病叶所得溶液吸入并且滴入培养皿内，再把培养皿放入恒温光照培养箱中培养，最后挑出好的孢子纯化菌种，培养备用[3]。
首先取优尔个灭菌的培养皿，直径为6cm，把它们编号为：0、1、2、3、4、6，然后将PDA培养基融化后分别倒入这优尔个培养皿中，再把苦参药液制备成浓度为0、3、6、9、12、15mg/mL的溶液分别倒入编号的培养基内与PDA充分混匀。在培养基中培养备用的纯化新鲜菌种，用毛笔轻轻将条锈病菌孢子均匀地扫于这优尔个培养皿中的培养基上，然后放回恒温培养箱中持续培养12h。最后把它们挑出放在血球计数板上于显微镜下检查孢子萌发情况[6]。看哪个抑制率最好，测定最适浓度。试验重复三次。
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