产扁桃酸脱氢酶菌株的分离和酶的提取纯化(2)
4.1 发酵时间对恶臭假单胞菌FJ506生长的影响 14
4.1.1 配制培养基 14
4.1.2 接种 14
4.1.3 菌体生长状况测定 14
4.2 接种量的影响 14
4.2.1 配制培养基 14
4.2.2 接种及菌体生长状况测定 14
4.3 实验结果与分析 15
4.3.1 发酵时间对恶臭假单胞菌FJ506生长的影响 15
4.3.2 接种及菌体生长状况测定 15
5 R-扁桃酸脱氢酶的分离纯化 17
5.1 前言 17
5.2 实验试剂与材料 17
5.2.1 实验试剂 17
5.2.2 实验材料 17
5.2.3 配制培养基 17
5.3 实验方法 18
5.3.1 R-扁桃酸脱氢酶粗酶液的提取 18
5.3.2 R-扁桃酸脱氢酶盐析处理 19
5.3.3 疏水层析 19
5.3.4 酶活及蛋白含量测定 20
5.3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 22
5.4 实验结果与分析 24
5.4.1 疏水层析结果 24
5.4.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 24
5.4.3 R-（-）-扁桃酸脱氢酶的分离纯化结果 25
6 R-扁桃酸脱氢酶酶学性质测定 27
6.1 最适pH的探究 27
6.2 最适温度的探究 27
6.3 金属离子对酶活的影响 28
6.3.1 配制含金属离子的缓冲液 28
6.3.2 测定金属离子对酶活影响 28
6.3.3 实验结果 28
6.4 产物中含苯乙酮酸的验证 28
6.4.1 基本原理 28
6.4.2 操作步骤 29
6.4.3 实验结果 29
6.5 铁氰化钾作为电子传递载体的探究 29
6.5.1 反应机制 29
6.5.2 操作步骤 30
6.5.3 实验结果 30
6.6 巯基乙醇对酶保存的影响 30
6.7 实验结果与讨论 30
6.7.1 最适pH实验结果 30
6.7.2 最适温度实验结果 31
6.7.3 其他性质探究结果 32
结 论 33
致 谢 34
参考文献35
附 录 40
1. 绪论
1.1 手性扁桃酸研究概况
1.1.1 手性物质介绍
手性物质作为同分异构体在医药、食品等领域有着很广泛的应用[1]。
手性药物在医药领域是一类非常常见的化学药物[2，3]。一般来讲体内大分子与手性分子的生物活性反应有着严格的手性识别以及匹配要求，然而不同对映体与体系中的大分子反应，有时会结合上不同的大分子，有时会因为匹配的程度不同，造成了药物具有明显的药动学活性和药理学活性差异，例如布洛芬、奥美拉唑等常见药物就具有此特点[4]。另外，手性药物对于改善药物活性、特异性等方面也有明显的效果，此外这类药物还可以缓解一些药物副作用。
手性物质在其他领域也有着很广泛的应用，比如食品、营养品、食品添加剂，所以对于手性物质的研究有着重要的意义[5]。
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