摘要豆科植物百脉根的BIO ORGANS基因（LjBIO）已经被证实与花器官对称性和大小调控有关。目前尚未有关于LjBIO基因具体功能和调控机制的研究报告，也未见任何对拟南芥中同源基因At3g24150与At4g32295的功能解析。本研究利用模式植物拟南芥作为材料，希望通过对BIO同源基因启动子的克隆及初步表达分析，来揭示BIO及其同源基因的潜在功能、调控区域和分子机理。46710

毕业论文关键词：拟南芥；同源基因；启动子；克隆

BIO ORGANS (BIO) gene was identified to play a role in dorsoventral differentiation, organ internal asymmetry and floral organ size control in Lotus japonicus. There is no reports of its function and applications at present, neither of its homologous genes in Arabidopsis. In this study, we plan to use model plant arabidopsis as materials. We will clone the promoters of LjBIO homologous genes, analyze their origins and expression patterns, study their function and mechanism in controlling organ size and internal asymmetry, explore their potential roles in stress tolerance, and make use of its function in changing flower shape and size.

Keyword：Arabidopsis; Homologous genes; promoter; cloning

 目    录

1 引言 5

1.1研究背景 5

1.2研究的基本内容 6

2 试剂与材料 6

2.1材料 6

2.2试剂 6

2.3主要仪器 6

3 实验方法 7

3.1启动子的克隆 7

3.1.1 提取拟南芥基因组 DNA 7

3.1.2 以DNA为模板PCR扩增 7

3.1.3 PCR产物回收 10

3.1.4 PCR产物与T载体的连接反应 10

3.1.5 连接产物转化感受态细胞 10

3.1.6 菌落PCR鉴定 10

3.1.7 大肠杆菌内质粒DNA的提取 10

3.1.8 克隆载体酶切验证 11

3.2 表达载体的构建 11

3.2.1 克隆载体以及表达载体的酶切 11

3.2.2 目的片段与载体片段的连接 11

3.3 表达载体转化农杆菌 12

3.3.1 农杆菌感受态细胞的制备（CaCl2法） 12

3.3.2 质粒转化农杆菌(冻融法) 12

3.4 拟南芥的养殖及转化 12

3.4.1 拟南芥的养殖 12

3.4.2 拟南芥转基因及筛选 12

3.5 GUS蛋白的组织化学染色 13

4 结果和讨论 13

4.1 pAt4g32295L、pAt3g24150L、pAt4g32295S和pAtg24150S 的克隆结果 13

4.1.1 特异性PCR扩增 13

4.1.2 克隆载体酶切验证 14

4.2 表达载体的构建 15

4.2.1 表达载体的酶切验鉴定 15

4.2.2 农杆菌菌落PCR验证 16

4.3 转基因的结果