灵芝孢子粉多糖的提取与性能表征(3)
1.1.1 灵芝多糖结构灵芝多糖是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质， 是有三股单糖组成的具有螺旋状立体构形的一种物质，类似于脱氧核糖核酸、核糖核酸。分子量从数千到数万，是一种大分子化合物。不溶于高浓度的酒精，微溶于低浓度的酒精和冷水，在热水中能全部溶解。灵芝多糖中除含有葡萄糖外，大多还含有多种糖苷键，但含量较少。单糖间糖苷键连接有1,3、1,4和1,6多种。大部分是β型结构，少部分是α型。α型多糖没有药理活性。灵芝多糖在水溶液中多糖链一般由三股糖链组成，在 o.1摩/升氢氧化纳溶液中时，多糖链的三股糖链会发生解离成为单股单糖链。多糖的药理活性与单糖间糖苷键的组合形式有关。单糖间以β-1,3、1,6或β-1,4、1,6-糖苷键连接的时候，多糖具有药理活性，而纯β-1,4-糖苷键连接的则没有药理活性。并且，多糖的药理活性还和立体构形有关，如果螺旋形立体结构被破坏，则其药理活性会大大降低。1.2 灵芝多糖的提取方法1.2.1 水提醇沉法多糖溶于水而不溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂。用热水进行提取，主要是通过热水使细胞发生质壁分离，水渗透进细胞壁和细胞质中，溶解液泡中的物质，使其穿过细胞壁，扩散到外部溶剂中，通过扩散作用使细胞内或细胞间的物质渗出。刘英梅等人采用水提醇沉法提取灵芝孢子粉中多糖，得到的最佳工艺条件是提取时间 3 h，提取次数4 次，提取温度 80℃，料液比1∶5。[1]1.2.2 超高压技术超高压提取也称超高冷等静压提取，是指在常温下用 100~1000MPa 的流体静压力作用于提取溶剂和中药的混合液上，并在预定压力下忽然增大，细胞膜的结构发生变化，使得细胞内有效成分能穿过细胞的各种摸而转移到细胞外的提取液中， 达到提取中药有效成分的目的。[2]杜冰等人采用超高压技术提取灵芝多糖， 通过正交试验法， 所得出的最优工艺条件为：压力 400 MPa，温度为 50℃，固（g）液（mL）比 1:40，保压时间低于6 min；提取得率为 2.762%。[3]1.2.3 挤压法提取挤压技术是指对原材料进行预处理，在一个相对密闭的由螺杆和套筒组成的的空间里，受到机械力作用，材料通过一个专门设计的空洞被挤出的方法。挤压加工过程是一个高温高压的过程，通过调整工作参数， 可以很容易地调整压力、剪切力、温度和持续时间。[4]焦艳丽等采用正交试验优化挤压工艺条件得出：水分含量 15%、螺杆转速 223r/min、温度125℃、 进料速度155g/min， 在此条件下灵芝孢子破壁率为78.6%， 多糖得率为2.219%，通过在此最佳条件下进行二次挤压，灵芝孢子破壁率提高为 83.48%，多糖得率为2.37%。[5]1.2.4 超声波-超低温冻融吴映明等人利用苯酚-硫酸法对破壁处理后的灵芝孢子粉多糖含量进行测定，结果表明采用超低温冻融处理和超声波处理进行灵芝孢子粉破壁均具有效果好、 成本低及操作简便等特点；增加冻结-解冻循环次数在一定程度上能提高多糖含量，循环次数以 5次～7次为宜；将超声波处理法和超低温冻融法结合起来，其多糖释放更高，效果更佳。[6]
1.2.5 超临界 CO2微乳萃取超临界 CO2 对极性和分子量较高的生物活性物质的溶解度很低，但是使用合适的表面活性剂和水话，能够使这些生物活性物质在超临界 CO2 中的溶解度大大增加。由于微乳的屏蔽作用，使这些生物物质不与有机溶剂直接接触，而水池的微环境又保护了生物物质的活性，达到了溶解和分离生物物质的目的。[7]袁雨婕等建立了 SC-CO2/Tergitol TMN 6/H2O微乳体系，首次研究了超临界 CO2 微乳对灵芝孢子粉多糖及天花粉多糖的萃取效果。实验结果表明，超临界CO2 微乳对灵芝孢子粉及天花粉中多糖成分具有明显的萃取效果，多糖转移率均较高。[8]1.3 本课题的研究内容、目的及意义1.3.1 研究内容（1） 单因素实验在本次研究中采用水提醇沉法提取灵芝多糖及灵芝孢子粉多糖。固定其余条件不变，只变动一个变量， 确定该变量的最优提取条件。 分别得出热水浸提时提取时间、 浸提温度、料液比以及醇沉时乙醇浓度、醇沉时间、乙醇体积比的最优条件，提高多糖提取率。（2） 正交实验正交实验法就是利用正交表来对试验进行整体设计、综合比较、统计分析，从而达到只进行少量的实验就找到较好的生产条件的目的，达到最高的生产工艺效果。正交表可以平衡采样在因素变化范围内，使每次的试验都具有较强的代表性，由于正交表有着均衡分散的特点， 能够保证全面实验的某些要求源Y自:优尔W.论~文'网·www.youerw.com， 这些试验往往可以得到较好或更好的实验目的。通过单因素实验得到的优化实验条件，缩小实验条件跨度，从而得到更优化的实验条件，使多糖提取率更高。（3） 测定多糖含量苯酚硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。DNS即二硝基水杨酸法的原理是在碱性条件下，DNS 会与还原糖发生氧化还原反应，生成 3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度下，该产物的颜色深浅与还原糖含量成正比关系，最后通过比色法测定还原糖含量。因为它的显色的深浅只和从糖类中游离出来的还原基团的数量有关， 而对还原糖的种类没有选择性， 所DNS法适合用在多糖水解产生的多种还原糖体系中。先采用苯酚硫酸法测定提取物的总糖含量，再通过DNS 法测定其还原性糖的含量，得到多糖提取量为总糖含量-还原性糖含量。
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