1 前言 

水对我们的生命起着重要作用，是生命的源泉，是我们人类赖以生存的重要资源之一，是大自然赐给我们一笔最宝贵的财富[3]。然而水资源并不是取之不尽用之不竭的，随着时代发展，人类用水量也日益增加，对水资源的污染程度也更加严重。水中微生物的种类和数量是衡量水卫生质量的重要指标之一。在受污染的水体中，含有大量酚类化合物、有机农药和油脂等有机物和营养物质，非常适合各种微生物的生长繁殖[4]。人和动物的粪便是水中微生物的主要来源。这些微生物尤其是各种病微生物是引起水传播疾病暴发的根源，如果饮用了受污染的水，病原微生物就会入侵人体，人体就成为了病原体的宿主，可能引起人的腹泻等肠道疾病，危害人体健康。如果洗涤和沐浴了受污染的水，容易感染眼睛和皮肤等疾病[5]。

因此，为了我们日常的用水安全，对水中微生物的指标进行检测和控制是必不可少的。但是在实际操作中，是无法对各种微生物进行一一检测的。所以通过对指示菌的检测和控制，能够指示水体是否受过污染，污染的程度有多高，能够对污染趋势做出预测，以此对水质进行评价，确保日常用水的卫生安全。我国和国际上现在采用的指示菌是大肠菌群。大肠菌群具有一般指示菌的特征，主要来自人和动物的粪便。在实际水质检测中，主要检测水中的菌落总数和总大肠菌群数。

1 mL待测样品有氧条件下，在营养琼脂上恒温（37℃）培养48 h后出现的细菌总数称为菌落总数。在恒温（37℃）下培养24 h后，能分解乳糖并产酸产气的一群需氧兼性厌氧型革兰氏阴性无芽孢杆菌称为总大肠菌群[6]。采用平皿计数法来测定菌落总数[7]，多管发酵法来测定总大肠菌群数[8]。

2 材料和仪器

2.1 水样

地点1，高邮湖边某高邮鸭养殖基地附近水域。

地点2，高邮湖边某化工厂排污管道附近水域。 

地点3，高邮湖边村民居住区附近水域。

将取得的水样密封，待用。

2.2 仪器

试管（15 mL）若干、烧杯（1000 mL、2000 mL）若干、平皿（90 mm）若干、移液管（1mL）若干、容量瓶（1000 mL）若干、杜氏小管若干、放大镜、显微镜、涂布棒、接种环、恒温培养摇床（BS-1E）、培养箱（FYL-YS-150L）等。仪器均需做灭菌处理，以防杂菌污染，影响实验数据。

2.3 试剂

蒸馏水、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、结晶紫染液、碘液、乙醇浓度95%（V/V）、番红复染液、溴甲酚紫乙醇溶液浓度1.6%（W/V）、0.5%美兰水溶液（W/V）、2%伊红水溶液（W/V）、20%乳糖（W/V）、0.1mol/L氢氧化钠溶液、0.1mol/L盐酸溶液、营养琼脂等。

2.4 培养基 

（1）营养琼脂培养基：称取10.0 g蛋白胨，3.0 g牛肉膏，5.0 g氯化钠，15.0 g琼脂，pH调节范围为7.2-7.4，加热溶解，加蒸馏水混匀定容至1 L。在121℃温度下灭菌15 min后冷却制作平板，每个平板倒入15 mL的营养琼脂培养基，共27个平板。

（2）一倍乳糖蛋白胨培养液：称取3.0 g牛肉膏，5.0 g乳糖，5 .0g 氯化钠和10.0 g蛋白胨，加浓度为1.6%的溴甲酚紫乙醇溶液1 .0 mL，pH调节范围为7.2-7.4，加热溶解，加蒸馏水混匀定容至1 L。在36支发酵试管中各加入5 mL，在115℃温度下灭菌20 min。

（3）三倍乳糖蛋白胨培养液：称取9.0 g牛肉膏，15.0 g乳糖，15.0 g 氯化钠和30.0 g蛋白胨，加浓度为1.6%的溴甲酚紫乙醇溶液3.0 mL，pH调节范围为7.2-7.4，加热溶解，加蒸馏水混匀定容至1 L。在30支初发酵试管中各加入5 mL，在6个初发酵三角烧瓶中各加入50 mL，在115℃温度下灭菌20 min。