醇脱氢酶的提取与纯化+文献综述(2)
3.2.1 生物材料· 14
3.2.2 主要试剂· 14
3.2.3 常用储存液及配制方法· 14
3.2.4 仪器与设备· 15
3.3 实验方法 15
3.3.1 酶活力测定方法· 15
3.3.2 苯乙醇脱氢酶的提取纯化· 16
3.3.3 影响提取纯化因素的考察· 16
3.4 结果与讨论 17
3.4.1 超声波破碎全程时间的选择结果 17
3.4.2 超声工作与间歇时间比的选择结果 18
3.4.3 硫酸铵最佳盐析范围· 19
4 苯乙醇脱氢酶酶学性质研究 21
4.1 引言· 21
4.2 材料· 21
4.2.1 生物材料· 21
4.2.2 主要试剂· 21
4.2.3 常用储存液及配制方法· 21
4.2.4 仪器与设备· 22
4.3 实验方法 23
4.3.1 蛋白质含量的测定· 23
4.3.2 酶反应最适温度的测定· 23
4.3.3 酶的热稳定性测定· 24
4.3.4 酶反应最适pH的测定· 24
4.3.5 酶的pH耐受性测定· 24
4.4 结果与讨论 24
4.4.1 蛋白质含量测定结果· 24
4.4.2 酶反应最适温度测定结果· 25
4.4.3 酶的热稳定性测定结果· 26
4.4.4 酶反应最适pH测定结果· 27
4.4.5 酶的pH耐受性测定结果· 27
结 论· 29
致 谢· 30
参 考 文 献· 31
1 引言
1.1 生物催化技术研究概况
1.1.1 生物催化技术
生物催化( biocatalyst)是指利用酶或有机体(细胞、细胞器等)作为催化剂实现
化学转化的过程,又称生物转化( biotransformation)，是生物学、化学、过程工程
科学的交叉领域。生物催化反应具有高度的化学、区域和立体选择性,适用于医药、
食品和农药等精细化工产品的合成制备。生物催化过程一般无污染或污染较少、能耗
相对较低,是一种环境友好的合成方法,将为绿色化学工业做出贡献。近年来, 随着基
因组学、蛋白质组学等生物技术的飞速发展, 大大地推动了生物催化的基础研究和应
用研究。人们普遍认为生物催化将是生物技术革命的第三次浪潮。世界经合组织(OECD)
指出: “生物催化技术是工业可持续发展最有希望的技术”[1]。
1.1.2 生物催化在有机合成中的应用
生物催化给有机合成带来的最大益处表现在生物催化的高度选择性：(a)化学选
择性，即在其它活性基团存在的情况下，只作用于某个基团；(b)区域选择性和非对
映选择性，生物转化酶能有效地区分不同化学环境下的功能基团；(c)对映体选择性，
酶作为手性催化剂进行选择性的和不对称的催化。同时生物转化与传统有机合成反应
相比，具有酶量充足和反应条件温和的特点，适中的酶反应温度(20－40℃)可以有效
地减小一些诸如重排反应等副反应的发生。生物转化反应类型广泛，常能催化一些不
太活泼的位点发生反应；生物转化还具有收率高、成本低，可以减少反应步骤等优点。
因而被越来越广泛地应用于有机合成领域，已经成为有机合成中的一个重要工具。
国际酶学委员会根据酶所催化的反应类型，将酶分为优尔大类：(1)氧化还原酶；
(2)转移酶；(3)水解酶；(4)裂合酶；(5)异构酶；(6)合成酶(或称连接酶)[2]。有机合
成中常用到的转化酶主要为水解酶类和氧化还原酶类[3]
。在已报道的生物转化中大约
有2/3为涉及到酯基和氨基的水解反应，主要是蛋白酶、酯酶和脂肪酶起作用，其它