(3) 混合液处理法

解离液中酒精起到的作用是快速的杀死细胞，使细胞停止分裂，分裂相能够得到固定；而盐酸能够使果胶溶解，软化植物细胞的细胞壁，溶解细胞间的中胶层物质，使细胞分离。

将根尖放入95%乙醇:浓盐酸=1:1的混合液中处理2~10min，在不同的教学中，采用的混合液浓度和处理时间有一定的差距。有丝分裂观察实验中采用的最多的就是混合液处理法，2002年梁英豪在对洋葱根尖细胞有丝分裂实验的改进中得出将解离液改用30%盐酸:无水乙醇=1:1时，解离效果最好[4]。

1.2.2  染色方法

(1) 龙胆紫染色法

    龙胆紫的稀溶液俗称紫药水，是一种碱性阳离子染色剂，原因是其具有碱性基团，但在使用龙胆紫溶液染色时，溶液略显酸性。

在实验过程中，我们选用的龙胆紫溶液比例浓度为0.01g/ml。但在植物细胞有丝分裂试验的实际操作中，因为染液的浓度过高，导致整个根尖在染色下颜色偏深，不易分辨根尖部位，在显微镜下染色体与细胞质的色差不明显，无法看到清楚的细胞内染色体组成结构，细胞的分裂过程也就无法清晰得呈现在学生面前。2012年姜丰仪对龙胆紫溶液的浓度经过多次试用，最终发现当染液的质量浓度比例为0.002g/ml时，染色效果最好[5]。

(2) 醋酸洋红染色法

1921年，Belling首创了醋酸洋红压片法[6]。醋酸洋红中的醋酸是该染色剂的溶剂，醋酸的作用是增加染色时细胞的通透性，使洋红进入细胞核对染色体进行染色。醋酸洋红在核、染色体的固定中常被用作染色剂。

实验中通常采用1%醋酸洋红：将洋红粉末1g倒入100ml45%醋酸溶液中，边煮边搅拌，煮沸（沸腾时间不超过30s），冷却后过滤，即可使用。也可再加入1%~2%铁明矾水溶液5~10滴，至此液变成暗红色而不发生沉淀为止[7]。如制作永久标本染色时，可加入饱和氢氧化铁或醋酸铁（媒染剂）溶液数滴，至染液呈浅蓝色为止。2003年龙雯虹等人在对萝卜花粉粒染色的方法研究中论证了1%醋酸洋红的染色效果最好，文章中也较加热对染色效果的影响做了研究，结果表明不经加热处理的染色效果较好[8]。

(3) 孚尔根染色法源]自=优尔^`论\文"网·www.youerw.com/

孚尔根染色法就是用希夫试剂(Schiff)作为染色剂，对DNA进行染色的方法。1924年孚尔根首先用希夫试剂作试验，故称为孚尔根染色法。

    Schiff试剂能够与醛类反应呈紫红色，又称品红醛试剂。用HCI水解时，DNA分子结构中的醛基-CH0得到释放，醛基与亚硫酸品红在亚硫酸品红液(Schiff)染色下结合，呈现出紫红色，这是DNA特有的显色反应，也就是孚尔根反应[9]。Schiff试剂有多种不同的配置方法，主要分为热配法[10]和冷配法[11]，本实验主要采用的是热配法：①0.5g碱性品红溶入100mL沸蒸馏水水中，再继续煮沸5min，并随时搅拌；②冷却到50℃时加入1g偏重亚硫酸钠，震荡盖紧，放暗处过夜；③次日取出呈淡黄色，加0.5g中性活性炭，剧烈震荡使颜色消退（若次日取出时为无色透明液体，可直接使用，不需加活性炭）；④过滤后，4℃冰箱或阴凉处保存外包黑纸，乙方在空气中加速氧化而变色。[12]。

植物细胞有丝分裂观察实验的方法有很多，不仅需要的条件不一样，得到的实验结果也不同。笔者在实习过程中发现，江苏地区普通高中使用的两种教材（人民教育出版社[13]、江苏教育出版社[14]）中植物细胞有丝分裂观察的实验方法不仅没有统一，而且过程都较为复杂，如果在课堂实验教学中一成不变地按照教材的方式进行实验，植物细胞有丝分裂实验所花费的时间较长，取得的效果也不太明显，甚至存在失败的可能，很难达到预期的教学效果，不利于课堂实验的开展，有可能会导致教师放弃课堂实验的操作。因此，本文就主要对实验中解离、染色等实验环节进行了改进和优化，以便得到一个较为统一，并且能够得到良好实验观察效果的试验方法。