1.3 乙醛脱氢酶的研究进展

1999年，福利尼亚工学院和州立大学的Julianna Toth等教授多次分离纯化培养（培养温度35℃，时间10-12h）CLostridium菌株，经发酵后用3GA-agarose和Sephacry2 S-300柱层析得到了ALDH。同年，日本九州大学的Takeshi Nagai教授采用多种现代生物分离技术相结合的分离方法从飞鱼肝脏线粒体中分离得到了ALDH[6]。

2000年，美国Fabienne Remize 教授从酿酒酵母菌中分离得到了ALDH，同是实验结果还表明Mg2+对ALDH有激发作用，而K+对ALDH没有影响。2001年，美国南伊利诺斯州大学的Yves等教授对一株沙门氏菌进行诱变培养，分离纯化得到了较高活性的ADH，同事也说明ADH和ALDH是乙醇在人体内代谢所必须的两种酶。华侨大学化工与生化工程系的研究者李夏兰，蔡婀娜曾讨论了从微生物细胞中提取乙醇脱氢酶。主要探讨了分别从醋酸杆菌发酵液和酵母细胞中提取乙醇脱氢酶的可能性。2002年，荷兰Wai-Kwan Tang等教授通过高速离心，硫酸铵盐析以及a-cyanocinnamate-Sepharose、Affi-gel Blue agarose和SDS-PAGE柱层析得到了Mr为57.5kDa的ALDH。2003年，瑞典卡罗林卡学院的L.HjeLmqvist教授通过高速匀浆处理原料，提取经高速离心、透析后的上清液依次进行柱层析，从甜菜中分离提取得到了ALDH9。

1.4 乙醛脱氢酶分离现状

    生物技术产品一般都存在一个比较复杂的多项体系中，目前开发研究的生物产品的分离技术有很高的要求，分离与纯化部分的费用占总成本的50%以上。因此，研制出新的分离纯化方法很是重要。

目前，国内外采用的是传统的酶分离纯化方法，从动物和微生物中分离纯化得到乙醛脱氢酶，大致分为以下几种。

1.4.1 盐析沉淀法文献综述

蛋白质在稀盐溶液中，其溶解度会随浓度的升高而增加，这种现象被称为盐溶。但是当盐的浓度继续增高时，蛋白质的又以不同程度地从溶液中析出，此种现象被称为盐析[7]。上述现象是由于蛋白质分子中极性基团之间存在静电力。在低盐浓度下，蛋白质分子中极性基团之间的静电力受盐离子的影响而被消除，蛋白质在水中的机型集团的电荷被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出。盐析法就是根据不同蛋白质在一定浓度的盐溶液中溶解降低程度的不同而达到彼此分离的方法。利用超声波破碎法从酿酒酵母细胞中分离纯化ALDH，超声波破碎后采用硫酸铵分级盐析预处理，粗酶液先用40%饱和度的硫酸铵沉淀，除掉部分杂蛋白后留取上清液，再将其上清液用90%饱和度的硫酸铵沉淀，回收目的蛋白，回收率较大但纯化倍数不高。