纤维素酶是一种活性很高的生物催化剂[4]，它不是单一的酶，而是一类较复杂的酶复合物，它的组分分为3类：葡聚糖外切酶(exoglucanses , CBH)，这类酶能够从纤维分子的非还原端依次水解β-1，4-糖苷键，切下纤维二糖分子；葡聚糖内切酶(endoglucanases, EG)，这类酶能够在纤维素分子内部随机地水解β-1，4-糖苷键，生成大量的小分子纤维素；β-葡萄糖甘酶(β-glucosidases, BG)，这类酶能够将纤维二糖分子及其他的低分子纤维糊精水解生成葡萄糖[5]。关于纤维素酶的作用机理，至今仍然没能达成一致意见，不过目前多数人都认为是纤维素酶的各组分协同作用来降解纤维素的。有不少学者对此提出过不同的观点，比如：协同作用假说、顺序作用假说、C1-Cx假说、碎片理论等等[6,7]。由此可见，对纤维素酶系的作用机理以及它们各组分间的相互作用关系，到目前为止并没有完全研究清楚，还有待进一步研究和探讨。文献综述

前期研究中课题组以[Amim](Cl)为筛选压力从化工厂污染土壤中获得了一株产耐离子液体的纤维素酶产生菌 Trichoderma aureoviride HS ，该菌所产纤维素酶体现出较优越的离子液体耐受性，并且基于该酶课题组已成功构建了一个离子液体-纤维素原位酶解体系。为了进一步减少该酶的生产成本，优化上述体系的酶解效率，我们进一步对该菌的发酵产酶条件进行优化。

2 材料和方法

2.1 材料

2.1.1 菌株

Trichoderma aureoviride HS 被用于纤维素酶的发酵，Trichoderma aureoviride HS 的孢子保存在20%（w/v）甘油溶液中，并置于-80 C冰箱保存。

2.1.2 培养基

液体LB培养基：5 g/l酵母粉，10 g/l蛋白胨，10 g/l NaCl。

固体LB培养基：5 g/l酵母粉，10 g/l蛋白胨，10 g/l NaCl，20 g/l琼脂粉。

发酵基础培养基：磨碎稻草粉4%（w/v），玉米浆1%（w/v），磷酸二氢钾0.2%（w/v），氯化钴20 mg/L，硫酸镁0.3 g/L，硫酸亚铁5 mg/L，硫酸锰1.6 mg/L，硫酸锌1.4 mg/L，Glu 0.01%（w/v），尿素0.03%（w/v）。

2.1.3 试剂

A液：碳源4%（w/v），氮源1%（w/v），磷酸二氢钾0.2%（w/v）。灭菌锅灭菌121 C，20 min。

碳源：预处理稻草，磨碎稻草粉，麸皮，糠醛渣，微晶体纤维素。

    氮源：酵母粉， 胰蛋白胨，玉米浆，(NH4)2SO4，尿素。

B液：氯化钴20 mg/L，硫酸镁0.3 g/L，硫酸亚铁5 mg/L，硫酸锰1.6 mg/L，硫酸锌1.4 mg/L。先配成200倍母液，灭菌后放无菌台可前后使用几个批次，灭菌锅灭菌121 C，20 min，灭菌前用HCl调节pH至1~2。来!自~优尔论-文|网www.youerw.com

C液：Glu 0.01%（w/v），尿素0.03%（w/v）。先配成100~200倍母液，每批次配制，灭菌锅灭菌115 C，15 min。

氧载体：正已烷，正庚烷，大豆油，十六烷，乙酸乙酯。

种子液：液体LB培养基接入实验室保存的菌种。

纤维素酶测定试剂

DNS：

 蒸馏水：                     1416 ml

氢氧化钠：                     19.8 g

3,5-二硝基水杨酸（DNS）：      10.6 g

溶解后再加入：酒石酸钾钠        306 g

苯酚（50 C熔化）：             7.6 ml

偏重亚硫酸钠：                 8.3 g

用5-6 ml，0.1 M的HCl对3 ml配好的溶液进行滴定，用苯酚作指示剂，溶液从红色变成原有颜色。如果有必要时还需加入氢氧化钠，配好的DNS分装后需避光保存。