NaNO2 连云港市化学试剂厂

H2O2 上海桃浦化工厂

结晶紫 中国医药（集团）上海化学试剂公司

乙醇 国药集团化学试剂有限公司

草酸铵 上海化学试剂总厂所属上海试剂一厂

碘 上海化学试剂总厂所属上海试剂四厂

碘化钾 中国医药（集团）上海化学试剂公司

香柏油 上海标本模型厂

葡萄糖 国药集团化学试剂有限公司

乳糖 上海化学试剂总厂所属上海试剂二厂

蔗糖 SCRC国药集团化学试剂有限公司

溴百里酚蓝 上海试剂三厂

氨水 上海久亿化学试剂有限公司

2.4 培养基与材料

淀粉筛选培养基：淀粉20g，蛋白胨10g，2.5g NaCl，琼脂10g，自来水1000mL，pH自然。

斜面种子培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，5g NaCl，琼脂15-20g，自来水1000mL，pH为7.2-7.4。

蛋白胨液体培养基（用作吲哚实验）：蛋白胨10g，5g NaCl，自来水1000mL，pH为7.2-7.4，121℃灭菌20min。

葡萄糖蛋白胨培养基（VP与MR试验）：蛋白胨5g，葡萄糖5g，5g NaCl，自来水1000mL，pH为7.2-7.4，121℃灭菌20min。

糖发酵培养基（作糖酵解试验）：蛋白胨2g，5g NaCl，0.2g K2HPO4 ，1%溴麝香草酚蓝水溶液3mL，待试糖10g(一般糖或醇按1%量加入，而半乳糖、乳糖按1.5%的量加入)，自来水1000mL，pH为7.2-7.4。

酪氨酸平板（作酪氨酸水解试验）：取L-酪氨酸0.5g悬浮在10mL蒸馏水中，20分钟灭菌，然后放于100mL无菌的营养琼脂混合，就成酪氨酸水解平板。

酪素平板（作酪素水解试验）：取5g脱脂奶粉加入50mL的蒸馏水中，另外称取1.5g琼脂溶解于50mL蒸馏水中，将两液分开灭菌。待冷却至45-50℃时，把两液混匀倒平板，就成牛奶平板。

西蒙斯氏柠檬酸盐培养液（作柠檬酸盐利用试验）：柠檬酸钠2g，5g NaCl，0.2g MgSO4·7H2O，1g K2HPO4·3H2O，1g (NH4)2HPO4，1%溴麝香草酚蓝水溶液10mL，琼脂15-20g，自来水1000mL，pH 7.0，121℃灭菌20min。文献综述

淀粉牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用可溶性淀粉2g，牛肉膏3g，蛋白胨10g，5g NaCl，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH为7.2-7.4。

明胶培养基（做明胶液化试验用）：牛肉膏3g，蛋白胨10g，明胶12g，蒸馏水1000mL，pH为7.0。

高盐培养基（做耐盐试验）：牛肉膏3g，蛋白胨10g，2g、5g、7g的NaCl ，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，pH为7.2-7.4。

半固体培养基（作运动性实验）：琼脂含量为0.5%，其他组分的比例按牛肉膏蛋白胨培养基来配制。

3.实验方法

3.1土壤悬液的制备与稀释

各称5g土壤样品装于装有45mL无菌水的100mL锥形瓶中，放入玻璃珠与土壤悬液，一起振荡，制成土壤悬液。置100℃沸水浴10min，杀死非芽孢杆菌。再静置5min。[8]吸取上清液0.5mL加到含有49.5mL无菌水的三角瓶中，配成10-2g/mL的土壤悬液，并进一步稀释至10-3g/mL、10-4g/mL和10-5g/mL，共四个浓度梯度[10]。

3.2溶液配制

(1) 硫酸羟胺溶液 C[(NH2OH)2SO4]=2mol/L

(2) 氢氧化钠溶液 C(NaOH)=5mol/L

(3) 盐酸溶液 C(HCl)=2.5mol/L       C(HCl)=0.1mol/L（由于配制氯化铁溶液）