摘  要本实验是建立一种能够稳定的测定赖脯胰岛素等电点的等电聚焦电泳方法。通过对赖脯胰岛素溶解前处理条件进行优化，用宽范围pH3-10的载体两性电解质pH梯度平板胶和多功能平板等电聚焦电泳系统进行等电聚焦电泳。结果显示，赖脯胰岛素经微量醋酸助溶，冷冻干燥处理，用上样缓冲液溶解后进行等电聚焦电泳可以检测出赖脯胰岛素的等电点，并且用赖脯胰岛素样品与赖脯胰岛素标准品一起电泳比较两者等电点，结果两者等电点一致，pI约为5.4。说明经过条件优化后的赖脯胰岛素通过等电聚焦电泳可以稳定的检测赖脯胰岛素的等电点。通过本实验可以为检测胰岛素、胰岛素类似物以及难容蛋白质和多肽类药物的等电点提供方法参考，为工业上生产赖脯胰岛素提供等电点数据指标。69175

该论文有图6幅，参考文献15篇。

毕业论文关键词：赖脯胰岛素  等电聚焦电泳  等电点

Determination the Isoelectric Point of Insulin lispro

Abstract

This experiment is the establishment of a stable determination of insulin lispro isoelectric point (pI) isoelectric focusing electrophoresis method.Pre-treatment conditions that dissolved the insulin lispro were optimized,and the IEF was performed with pH gradient gel carried a wide range pH3-10 ampholytes and using multifunctional flat isoelectric focusing electrophoresis (IEF) system.The results show that the pI of insulin lispro could be detected after the insulin lispro was treated by the following steps:the insulin lispro was solubilized by trace of acetic acid,and then it were frozen and dried and dissolved by the loading buffer. The pI of insulin lispro was about 5.4,and which was coincident with the standard insulin lispro.The experiment shows that the pI of lispro insulin could be stably detected by IEF when lispro insulin was treated in the optimal conditions.Through this experiment which could provide a good method reference for the isoelectric point detection of the insulin,insulin analogues,and protein and peptide drugs,and the test would provide certain data index for the industrial production of insulin lispro.

Key Words: insulin lispro  isoelectric focusing electrophoresis  isoelectric point

目  录

摘要-Ⅰ

Abstract--Ⅱ

目录-Ⅲ

图清单-Ⅳ

1 绪论--1

2 材料和方法--2

2.1材料-2

2.2方法-2

2.3结果判断-4

3 结果与分析--4

3.1预实验BSA等电点测定结果4

3.2赖脯胰岛素样品等电点测定结果-6

3.3赖脯胰岛素样品和赖脯胰岛素标准品等电点测定结果-7

4 讨论8

5 结论9

参考文献-10

致谢-11

图清单

图序号 图名称 页码

图3-1 BSA等电聚焦电泳的等电点图谱 5

图3-2 标准品（Marker）pH梯度曲线1 5

图3-3 赖脯胰岛素样品等电聚焦电泳的等电点图谱 6

图3-4 标准品（Marker）pH梯度曲线2 6

图3-5 赖脯胰岛素样品和赖脯胰岛素标准品等电聚焦电泳的等电点图谱 7

图3-6 标准品（Marker）pH梯度曲线3 7

1 绪论

随着现代生活水平和人们生活质量的不断提高，糖尿病的发病率也在迅速的增长，且糖尿病患者年龄正不断趋于年轻化。糖尿病与肿瘤和心脑血管疾病一样，也成为了对人类健康有严重危害的慢性疾病。目前，临床治疗糖尿病的治疗方法只能控制糖尿病人的病情不能完全治愈糖尿病。针对糖尿病的治疗，胰岛素治疗糖尿病已成为一种能有效控制血糖和推动治疗达标的治疗方法[1]。但由于常规胰岛素在糖尿病病人体内不能有效地重建正常的生理性胰岛素分泌, 从而使低血糖发生率高, 对临床应用产生影响。为了满足糖尿病病人在使用胰岛素治疗时，胰岛素在糖尿病病人体内的作用时间更能适应正常的胰岛素峰值以及餐后血糖水平能迅速上升的需要,研制出了模拟餐后胰岛素分泌的重组胰岛素类似物，速效胰岛素类似物和长效胰岛素类似物两类[2]。赖脯胰岛素就是模拟了餐后胰岛素分泌的人胰岛素类似物，是基因重组产生的速效胰岛素类似物[3]。在胰岛素治疗中，赖脯胰岛素辅助具有强化糖尿病治疗的疗效，是糖尿病患者新选择的一种可靠、安全、有效的治疗糖尿病的治疗方法。论文网