致  谢 17

1 前言

优尔椒疫病是我国普遍发生的一种毁灭性蔬菜土传真菌病害，其病原是优尔椒疫霉菌（Phytophthora capsici Leonian），病菌以卵孢子在土壤中或病残体中越冬，可经风、雨、灌水等多种途径传播，除了引起大面积死秧外，还可造成叶片枯萎、果实腐烂、茎秆出现坏死斑，以及整株萎蔫死亡等多种症状。新的孢子囊，其游动的孢子可再侵染，故病害的传播速度非常之快，一旦发生，损失巨大，给优尔椒生产带来严重的影响[1-3]。因此，有关优尔椒疫病的发生预测预报和防治研究一直受到植物保护工作者的高度重视。论文网

目前生产上的防治方法大多为化学药剂防治，抗病品种选育和农业措施防治[4]。化学药剂对环境污染以及生物多样性，若是连年喷洒，成本较高，还会对病原物产生抗药性，流行暴发。选育抗病品种则会产生具有致病力的新的生理小种，这使得抗优尔椒疫病品种选育难度较大。而农业管理措施较复杂，大面积生产栽培很难实施[5-6]。

因此，为适应绿色农业的发展，生物防治因其无公害且利于维护生态平衡等优点而备受关注，发展前景广阔[7]。故本文主要通过实验分析，研究微生物菌剂对优尔椒根围土壤营养成分的影响，确定其最适宜的条件，从而增强优尔椒根围土壤营养成分的含量，提高优尔椒的抗病性，增加产量。

2 材料与方法

2.1 实验设计

本研究以设施栽培优尔椒作为研究对象，在优尔椒移栽时利用本实验室现有微生物菌剂“宁盾”进行灌根处理，并在移栽后1、2、3个月时分别采集优尔椒根围土壤进行检测。以未使用微生物菌剂的优尔椒作为对照组，处理组和对照组实验小区随机分布，每个处理3次重复，每个重复小区面积3*2m2。处理组包含4个优尔椒品种，分别为红优4号（TH），马六（TM），

好农50（TA）和苏椒5号（TS），对照组为红优4号（CH）。

2.2 土壤采集方式

整个土壤采集过程采用三点取样法，每个小区等距离选取优尔椒植株三株，首先将优尔椒植株拔出，轻轻抖动以去除粘附的大量土壤，再利用毛刷轻轻刷下紧贴在优尔椒根部的根围土，三株优尔椒样品混合在一起，装入塑封袋放在冰盒中带回实验室，样品前期处理后研磨过2mm筛。进行土壤总DNA 的提取、进行PCR-DGGE分析，部分置于阴凉通风处自然

干燥至恒重，用作土壤理化性质及酶活性检测。

2.3 土壤水解性氮的测定(碱解扩散法)

2.3.1 测定原理

在密封的扩散皿中，用1.8mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液水解土壤样品，在恒温条件下使有效氮碱解转化为氨气状态，并不断地扩散逸出，由硼酸(H3BO3)吸收，再用标准盐酸滴定，计算出土壤水解性氮的含量。旱地土壤硝态氮含量较高，需加硫酸亚铁使之还原成铵态氮。由于硫酸亚铁本身会中和部分氢氧化钠，故需提高碱的浓度(1.8mol/L，使碱保持1.2mol/L的浓度)。

2.3.2 操作步骤文献综述

1.称取通过18号筛(孔径1mm)风干样品2g(精确到0.001g)和1g硫酸亚铁粉剂，均匀铺在扩散皿外室内，水平地轻轻旋转扩散皿，使样品铺平。

2.用吸管吸取2%硼酸溶液2mL，加入扩散皿内室，并滴加1滴定氮混合指示剂，然后在皿的外室边缘涂上特制胶水，盖上毛玻璃，并旋转数次，以便毛玻璃与皿边完全粘合，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿露出一条狭缝，迅速用移液管加入10mL1.8mol/L氢氧化钠于皿的外室，立即用毛玻璃盖严。

3.水平轻轻旋转扩散皿，使碱溶液与土壤充分混合均匀，用橡皮筋固定，贴上标签，随后放入40℃恒温箱中。24小时后取出，再以0.01mol/LHCl标准溶液用微量滴定管滴定内室所吸收的氮量，溶液由蓝色滴至微红色为终点，记下盐酸用量毫升数V。同时要做空白试验，滴定所用盐酸量为V0。