1.2.4丙二醛含量的测定
取甘薯叶片提取液2mL,加入0.6%TBA液2mL,混匀后置于水浴锅内沸水浴15分钟,离心机离心5分钟(4000r/min),取上清液用分光光度计分别在532nm,600nm,450nm波长下测定吸光度。
按双组分分光光度法原理,建立方程组,解方程组求出MDA含量。
CMDA(μmol·L-1)= 6.45(A532-A600)-0.56A450
提取液中MDA浓度(μmol·ml-1)C1MDA= CMDA×V1×10-3/V2
MDA含量(μmol·g-1 )= C1MDA×V/W
V1为反应液体积,ml
V2为测定液体积,ml
V为提取液体积,ml
W样品重量,g
1.2.5 POD活性的测定
取2支试管标号A管和B管,A管加入反应混合液 4mL 和1mL KH2PO4,B管加入反应混合液4 mL和1mL提取的POD酶液,溶液混匀后,用A管溶液调零,在470nm波长下测OD值,以1分钟内OD变化值来表示酶活性,酶活性用△OD/min.mg蛋白质表示。来,自|优;尔`论^文/网www.youerw.com
ΔA470:吸光值的变化
W:样品重量
V:提取液总体积,即10ml
Vt:测定时所用体积,即1ml
t:反应时间
1.2.6 CAT活性的测定
取2支试管其中A管为测试管,B管为对照管,A管和B管各加入1mlTris-Hcl,蒸馏水1.7ml, 酶液0.01 ml 其中B管加入的酶液为煮死酶液,将2支试管置于室温下3分钟,逐管加入0.2 ml H2O2(0.2 m ol/ L),进行比色,记录240nm吸光度的变化,1分钟记录一次,共记录3分钟。以每分钟OD值降低0.1为一个酶活力u。