酵母Pim1蛋白酶对二羟酸脱水酶的降解(2)
酵母菌是一些单细胞真菌酵母菌，在自然界分布广泛，主要生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，而在酿酒中，它也十分重要。在畜牧业中，酵母广泛用作精饲料以增加饲料中的蛋白质含量，对提高禽畜的出肉率、产蛋率和产乳率，对肉质的改良和毛皮质量的提高均有明显的效果。通过对酵母菌的培养及对酵母对二羟酸脱水酶的初步提取，探讨酵母Pim1蛋白酶对二羟酸脱水酶的降解方式。
1.材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 菌株
本实验所用的安琪甜酒曲购于湖北宜昌安琪酵母有限公司，其他实验药品均来自周口师范学院生命科学系分子生物学实验室。
1.1.2 培养基和缓冲液
培养基的配制：
成分 初筛（复筛）选培养基 扩大培养基（YPD培养基）
酵母膏 5 g 10 g
蛋白胨 10 g 20 g
琼脂粉 10 g 0
葡萄糖 10 g 20 g
总体积 500 mL 1000 mL
凝胶贮备液的配制：
成分 凝胶贮备液
丙烯酰胺（Acr） 29.2 g
亚甲基双丙烯酰胺（Bis） 0.8 g
总体积 100 mL
注：凝胶贮备液外包锡纸，4摄氏度冰箱保存。
破壁缓冲液（0.1 mol / L磷酸缓冲液PH 7.4）的配制：
称取NaH2PO4 3.12 g溶于100 mL水中；称取Na2HPO4 35.8 g溶于500 mL水中；取95 mL NaH2PO4溶液，405 mL Na2HPO4溶液混合在一起，定容至1000 mL。
洗脱液：0.1 mol / L PH 6.8 磷酸缓冲液。
分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl，PH 8.8) 的配制：
18.15 g Tris，加约80 mL重蒸水，用1mol/ L HCl调PH到8.8，用重蒸水稀释至最终体积为100 mL，4摄氏度冰箱保存。
浓缩胶缓冲液（0.5 mol/ L Tris-HCl，pH6.8）的配制：
6gTris，加约60 mL重蒸水，用1mol/L HCl调PH至6.8，用重蒸水稀释至最终体积为100 mL，4摄氏度冰箱保存。
10%SDS室温保存。
2倍还原缓冲液：
0.5 mol/L Tris-HCl，pH6.8 2.5 mL
甘油 2.0 mL
质量浓度10%SDS 4.0 mL
质量浓度0.1%溴酚蓝 0.5 mL
β-巯基乙醇 1.0 mL
电极缓冲液pH8.3的配制：
Tris 3 g，甘氨酸14.4 g，SDS 1.0 g，加重蒸水至1000 mL，4摄氏度冰箱保存。
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