参 考 文 献 13

致  谢 14

1  前言

农作物土壤病害普遍在各地发生且给农业生产带来巨大损失，典型有黄瓜枯萎病等，黄瓜枯萎病原为镰孢菌属的尖孢镰刀菌，是一种经土壤由根部或根颈部侵入，在维管束内寄生的系统性病害，在黄瓜生产上常造成较大损失[1]。黄瓜枯萎病的病原菌为尖镰孢菌黄瓜专化型,该病菌在土壤，病株或未腐熟的农家肥内，可通过雨水或灌溉水等途径远距离传播，是阻碍黄瓜生产的巨大障碍。

目前针对黄瓜枯萎病的主要防治方法以预防为主，结合使用抗病品种，采用轮作倒茬或嫁接等栽培管理措施，配合处理种子和土壤以及发病初期施药等化学方法，达到综合防治黄瓜枯萎病的目的。主要措施有：1)黄瓜收获后及时清除病残体；2）选用无病新土育苗；3）轮作；4）嫁接防病；5）种子消毒；6）加强田间管理；7）加强栽培管理；8）床土消毒；9）嫁接育苗；10）生物防治等等[2]。论文网

其病害的发生与根围土壤的酶含量与酶活性密切相关，脲酶广泛存在于土壤中，是研究得比较深入的一种酶[3]。脲酶酶促产物——氨是植物氮源之—。尿素氮肥水解与脲酶密切相关。有机肥料中也有游离脲酶存在[4]。研究土壤脲酶转化尿素的作用及其调控技术，对提高尿素氮肥利用率有重要意义。土壤三种形式的磷酸酶活性均与土壤全氮含量呈显著正相关，是重要的土壤肥力指标。蔗糖酶又叫转化酶，它对增加土壤中易溶性营养物质起着重要的作用，蔗糖酶与土壤许多因子有相关性，如与土壤有机质、氯、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度有关[5]。一般情况下，上壤肥力越商，蔗糖酶活性越强。它不仅能够表征土壤生物学活性强度，也可以做为评价土壤熟化程度和上壤肥力 水平的一个指标。纤维素是短物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一，是碳循环中的一个重要酶[6]。土壤中过氧化氢酶促过氧化氢的分解有利于防止它对生物体的毒害作用。过氧化氢酶活性与土壤有机质含量有关，与微生物数量也有关。一般认为土壤催化过氧化氢分解的活性，有30％或40％以上是耐热的，即非生物活性，常由锰、铁引起催化作用。土壤肥力因子与不耐热的即过氧化氢酶活性成正比例[7]。

因此选择从源头-土壤进行研究，研究土壤酶活性的影响，从而正确采用生物技术去解决这一病害，提高生产产量和质量。本文应用苯酚钠-次氯酸钠比色法，磷酸苯二钠比色法，3,5-二硝基水杨酸比色法，高锰酸钾滴定法分别对土壤中的脲酶，磷酸酶，蔗糖酶，纤维素酶以及过氧化氢酶进行了检测。

2  材料与方法

2。1 样品采集

2。1。1 实验设计

本研究以设施栽培黄瓜作为研究对象，在黄瓜移栽时利用本实验室现有微生物菌剂“宁盾”进行灌根处理，并在移栽后1、2、3个月时分别采集黄瓜根围土壤进行检测。以未使用微生物菌剂的黄瓜作为对照组，处理组和对照组实验小区随机分布，每个处理3次重复，每个重复小区面积3*2m2。处理组分别标记为T0-1, T0-2, T0-3, T1-1, T1-2, T1-3, T2-1, T2-2, T2-3; 对照组分别标记为C0-1, C0-2, C0-3, C1-1, C1-2, C1-3, C2-1, C2-2, C2-3。文献综述

2。1。2 土壤采集方式

整个土壤采集过程采用三点取样法，每个小区等距离选取黄瓜植株三株，首先将黄瓜植株拔出，轻轻抖动以去除粘附的大量土壤，再利用毛刷轻轻刷下紧贴在黄瓜根部的根围土，三株黄瓜样品混合在一起，装入塑封袋放在冰盒中带回实验室，样品前期处理后研磨过2mm筛。进行土壤总DNA 的提取、进行PCR-DGGE分析，部分置于阴凉通风处自然干燥至恒重，用作土壤理化性质及酶活性检测。剩余的则置于-20℃冰箱保存备用。