1。1  十大功劳属国内外研究现状

1。2  十大功劳属的化学成分研究进展

1。3  十大功劳属的药理活性研究进展

2 实验部分

2。1  实验仪器与材料

实验仪器：

BS224 S电子分析天平北京赛多利斯仪器系统有限公司；KQ-500B超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；Vacucella 22L真空干燥箱，德国MMM公司；Direct-Q3CHAO超纯是系统，美国密理博公司；ALPHA 1-2LDPLUS冷冻干燥机，德国ALPHA公司；Thermo LCQ Advanctage液相色谱仪-质谱联用仪，美国Thermo Electron公司；Bruker Avance 400 NMR核磁共振仪，美国布鲁克（Bruker）公司；DHC-9240A电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司；CBIO21多功能暗箱式紫外分析仪，北京赛百奥科技有限公司；Agilent 1260高效液相色谱仪，美国安捷伦公司(四元泵，柱温箱，UV 检测器)文献综述

实验试剂：

十大功劳叶样品购自贵州。乙腈和甲醇(色谱纯，江苏汉邦科技有限公司)，常用有机试剂：正己烷，石油醚，二氯甲烷，甲醇为分析纯购于南京化学试剂有限公司，三氯甲烷，乙酸乙酯，丙酮，正丁醇，乙醇均为分析纯购于国药集团化学试剂有限公司，浓硫酸，冰醋酸为分析纯购于上海久亿化学试剂有限公司。实验用水由美国Millipore公司纯水、超纯水系统提供。葡聚糖凝胶Sephadex LH-20为GE Pharmacia公司生产；硅胶板，青岛海洋生化工厂分厂( 50×100mm，厚0。2-0。25mm)；反相分析色谱柱：ZORBAX ODS（5 m，150 mm×4。6 mm）安捷伦，美国；反相半制备色谱柱: ZORBAX ODS C18，（5m, 250 mm×9。4 mm）安捷伦，美国；色谱溶剂系统：CH2Cl2/MeOH，PE/EtOAc（不同比例）； MeOH/H2O（不同比例）；TLC显色剂：紫外灯254，365nm； 10% H2SO4乙醇溶液；

2。2  实验方法

2。2。1  样品的提取分离

将干燥的十大功劳叶粗粉3。5 kg，以乙醇超声提取3次，每次2小时，滤过，合并乙醇液，减压回收乙醇，得乙醇粗取物浸膏（CE）460。4 g，得率为13。16%。乙醇粗提取物首先进行溶剂分组，利用极性由小到大的顺序依次萃取，减压浓缩，冷冻干燥可得正己烷萃取相（NHF）30。7g，得率为0。88%。二氯甲烷萃取相（CH）43。4 g，得率为1。24%。乙酸乙酯萃取相（EF）1。07 g，得率为13。16%。正丁醇萃取相（NHF）159。4 g，得率为4。55%。水相（NHF）189。5 g，得率为5。42%。

2。2。2  葡聚糖凝胶上样

样品经硅胶上样后，取其D段溶于甲醇中，过微孔滤膜后，上样。填料选择SephadexLH-20，30g，加入甲醇200mL，浸泡，垂直装好柱子，加入甲醇后，待填料稳定后，上样后使其自然沉降24h，流动相采用甲醇冲洗，流速为2mL/min。

2。2。3  薄层色谱法

薄层色谱是针对柱色谱及其他色谱分离后的样品的跟踪监测，由于其快速，灵敏，常用来指导样品的合并与定性监测。薄层色谱包括硅胶板，毛细管，展开剂以及显色剂等组成。实验中样品经硅胶和凝胶后，用收集试管按一定体积收集样品后，毛细管吸去样品液，轻轻点入硅胶薄层板，吹干后，放入密闭的展开缸中，不同比例的展开剂会带着样品向上爬动。样品按不同的极性被分离出来，将吹干后的硅胶板放在多功能暗箱式紫外分析仪上进行观察。用硫酸-乙醇显色剂喷雾显色，将有相同组分的小瓶合并。来-自~优+尔=论.文,网www.youerw.com +QQ752018766-

2。2。4  半制备高效液相色谱制备

经凝胶柱色谱分离出来的样品合并后，样品用旋转蒸发器浓缩，加入少量100%甲醇溶解，装入小瓶，过膜后装入样品瓶中。色谱条件：色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18分析柱（5μm,4。6×150mm）；流动相：水：甲醇=38：62；柱温：30℃；检测波长：254nm；流速：1。0mL/min；进样量：5μL，分析时间：30min。