摘要：本文以日本结球生菜(Lactuca sativa L。)为试材，首次建立了生菜(Lactuca sativa L。)的CRISPR/Cas9系统获得转基因植株。根据FANCM基因序列设计靶位点, 构建Lsfancm-CRISPR/Cas9载体，利用农杆菌介导的植物遗传转化方法进行生菜外植体的遗传转化。以生菜子叶作为外植体，通过分别与含有Lsfancm-CRISPR/Cas9载体的农杆菌共培养，在含有潮霉素的分化培养基上筛选转化子，获得潮霉素抗性再生苗，进而通过对抗性苗基因组DNA为模板进行PCR鉴定及PCR验证，获得FANCM基因突变体。79917 

毕业论文关键词：生菜；基因编辑；FANCM基因；遗传转化；CRISPR/Cas9

Use of gene editing and genetic transformation technology manufacturing lettuce FANCM mutant

Abstract:   Regard Lactuca sative L as a sample, according to the FANCM gene targeted gene sequence design points,to establish the carrier of Lsfancm-CRISPR/Cas9。 Use this agrobacterium  conduction plants genetic transformation methods to achieve the lettuce explant of genetic transformation。 Regard lettuce cotyledons as exophyte through the process of fostering with argobacterium conduction, get the converter during the differential medium of antibiotic (hygromycin) to gain the hyfromycin resistance regeneration seeding,in order to through the confrontational seeding genome DNA template to make the PCR authenticate to make sure that fusion gene fit into the lettuce gene group。 

Key Words: Lactuca sativa L; Agrobacterium-mediated genetic transformation;  gene editing; CRISPR/Cas9

目录

1绪论 5

1。1 本论文的背景和意义 5

1。1。1 生菜背景简介 5

1。1。2 CRISPR/Cas9 基因组定向编辑技术及发展前景 5

1。1。3 实验研究意义 6

1。2 CRISPR/Cas9 技术研究进展 7

1。3 本论文研究的主要内容和目的 7

1。4植物基因转化系统的建立及其主要影响因素 8

1。4。1农杆菌侵染的敏感性检测 8

1。4。2外植体的预培养 8

1。4。3外植体的农杆菌接种 8

1。4。4共培养 9

2。材料与方法 9

2。1 试验场地 9

2。2 实验材料 9

2。2。1 植物材料 9

2。2。2 质粒和菌株 9

2。2。3 试验药品 10

2。2。4 实验仪器 10

2。2。5 辅助材料 10

2。2。6培养基 10

2。3 试验设计与方法 11

2。3。1抗生素浓度与激素浓度确定 11

2。3。2农杆菌介导的生菜遗传转化体系 12

2。3。3生菜转基因植株的分子检测 13

3结果与分析 15

3。1生菜的遗传转化 15

3。1。1不同生长调节素的比例及种类对生菜再生过程中的影响