农杆菌的转化是影响预培养的时间的主要原因，根据植物的不同，其相对应的最佳培养时间也不同。（最佳预培养时间表示使外植体细胞处于最活跃分裂状态[13]。）根据研究表明,预培养此类外植体所需的时间通常约为48h。但需要注意的是，预培养时间并不是越长越有利，时间过长反而会使外植体的转化率大大降低,一定情况下还会致使外植体的死亡。预培养时间是否适宜对于整体实验来说是非常重要的。

1。4。3外植体的农杆菌接种

    外植体接种就是将外植体的切面与农杆菌进行侵染，把其方法是将外植体与特定的农杆菌浸泡一定时间,然后用无菌纸吸走多余的菌液。外植体与农杆菌浸染的时间不同，对农杆菌的接种有一定程度的影响。若浸染的时间太短，农杆菌可能没有被接种到外植体的切面。如果浸染时间太长，外植体会受到农杆菌的毒害而因为缺氧从而死亡。所以最佳的侵染时间，不仅可以提高农杆菌接种的速率，也减少了外植体被农杆菌毒害的几率。来-自~优+尔=论.文,网www.youerw.com +QQ752018766-

1。4。4共培养

    将浸染后的外植体放在固体培养基上进行培养，外植体的愈伤组织进行细胞分裂而农杆菌也同时增值生长的过程，称为共培养。

    研究表明,农杆菌附着于外植体后,并不能立即转化,只有在创伤部位生存16小时之后,菌株才能诱发肿瘤,这段时间称之为“细胞调节期”[13]。共培养时间与转化率之间有着显著的关系，对于不同的外植体和不同的农杆菌，有着不同的最佳共培养时间。而生菜的最佳共培养时间需要靠具体的实验来确定。

2。材料与方法

2。1 试验场地

 本试验在上海应用技术学院奉贤校区内第二学科楼无菌实验室和植物园进行。本实验全程需要在无菌的环境下进行，实验环境要求严格，并且大量依赖各种实验仪器。实验过程中，任何环节的污染都有可能导致实验的失败。实验室定期消毒仪器、试剂分门别类，排列有序，是本实验开始的前提。