表3 贵阳腐霉P。g在一周内的蚊虫平均存活率以及平均死亡率统计6

表4 对照组无菌水在一周内的蚊虫平均存活率以及平均死亡率统计6

表5 贵阳腐霉58号在一周内的蚊虫平均存活率以及平均死亡率统计 7

表6 P。g、58号以及无菌水实验结果差异显著性分析 7

贵阳腐霉单核的筛选

引言：蚊虫是主要的卫生害虫之一，它不只吸食血液，还传播各种流行疾病[1]。贵阳腐霉是苏晓庆教授在蚊尸上发现的一种灭蚊真菌，它侵染蚊虫幼虫，进而导致幼虫死亡[2]。是一种卵菌门、霜霉目、腐霉属的真菌[3]。而到目前为止，我国绝大部分地区使用化学药剂灭杀蚊虫。虽然现在使用的拟除虫聚酯杀虫剂毒性较小，但也会对其他有益昆虫造成影响[4]。长此以往，或多或少也会对人们造成伤害。但贵阳腐霉是一种寄生于蚊虫幼虫体内的寄生真菌，不会对人类以及其他有益昆虫产生毒害[5]。贵阳腐霉灭蚊的局限性在于它的灭蚊效果并不稳定，灭蚊的速效性也较差，不能像化学制剂一样马上体现其灭蚊效果。它的优点是持效性强，有望在生物防治上占有一席之地[6]。而怎么样克服贵阳腐霉灭蚊的局限性是一个很重要的课题，这也是我们进行本次试验的目的之一。据观察，一些种类的卵菌具有双核现象，贵阳腐霉也是其中之一，经过基因组测序以及酶切质粒和琼脂糖凝胶电泳技术观测，它的两个核具有不同的基因型，属于异源双核体[7]。将贵阳腐霉制片放在倒置荧光显微镜上观察，可以看到双核的游动孢子[8]。因卵菌菌丝无隔膜，无法依据菌丝观测其双核现象。但是贵阳腐霉产生的游动孢子有一部分也存在着单核的现象。我们试图分离这种单核的游动孢子，由于游动孢子比较微小，我们采用稀释涂板的方式，培养单菌落，试图经过逐代培育筛选出单核的贵阳腐霉[9]。我们想知道，如果能够分离培养出单核的贵阳腐霉，那么它能否克服贵阳腐霉灭蚊的局限性，或者根据它与双核贵阳腐霉的灭蚊效果的差异，找出能提高贵阳腐霉灭蚊能力可能的方法。而在培育的过程中，我们希望通过贵阳腐霉的生物学特性区分它的单核与双核[10]。我们观察了贵阳腐霉的菌丝体和游动孢子，希望从二者的表现型中找到贵阳腐霉单核与双核的区别特征。而贵阳腐霉的菌丝体隔膜消失，细胞核分布较为杂乱，游动孢子却存在着普遍的单双核现象，于是我们根据贵阳腐霉的游动孢子进行单双核的区分[11]。而在逐代筛选的过程中，我们发现了一个表型区别于贵阳腐霉野生型P。g的58号菌株，我们进而探讨贵阳腐霉P。g与贵阳腐霉58号在生物学特性以及灭蚊活性上的差异，希望从贵阳腐霉58号着手，验证贵阳腐霉58号是否为我们筛选的单核菌株以及通过58号寻找提高贵阳腐霉灭蚊活性的方法。论文网

1  材料与方法

1．1  菌种

本研究所用的菌种为野生型的贵阳腐霉P。g，其在V8培养基上繁殖传代。所用蚊虫为淡色库蚊[12]。

1．2  方法

1．2．1贵阳腐霉的培养

取长有野生型贵阳腐霉P。g的培养基，并将它放在卵菌专用的超净台上（超净台使用前需要进行半个小时的紫外线灭菌）[13]，观察野生型贵阳腐霉菌落，用灭菌的医用针头轻轻划动，在菌落的边缘位置划一个正方形的长有贵阳腐霉菌丝体的琼脂块。用针头挑取该正方形的琼脂块，并将琼脂块接到另一个固体培养基中，接种时要将长有贵阳腐霉菌丝体的一面与待接种的培养基的正面接合，置于培养基中央[14]。用封口膜封口，防止其他真菌或者细菌的污染。将接种过贵阳腐霉的培养基置于37℃培养箱中，一天后菌落直径可以达到15mm左右，气生菌丝较少[15]。