1.7.1 试剂的配制
芦丁标准溶液的配制:准确称取芦丁10 mg(120°C烘至恒重),用60%的乙醇进行溶解后定容至100 mL,得到0.1 mg/mL的标准溶液备用。
5% NaNO2溶液:称量12.5 gNaNO2固体,溶解后定容至250 mL备用。
10% Al(NO3)3:称取Al(NO3)3固体25 g,溶解后定容至250 mL备用。
4% NaOH:称取NaOH固体10 g,溶解后定容至250 mL备用。
空白对照组的配制:吸取5 mL 30%的乙醇置于具塞的试管中,加入5% NaNO2溶液0.3 mL,摇匀,放置6 min,再加10% Al(NO3)3溶液0.3 mL,摇匀,放置6 min,加4% NaOH溶液4 mL,用蒸馏水定容到10 mL。
1.7.2 标准曲线的绘制
精密吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的芦丁标准液分别置于具塞试管中,分别加入30%乙醇使之5 mL,然后分别加入5% NaNO2溶液0.3 mL,摇匀,放置6 min,再加10% Al(NO3)3溶液0.3 mL,摇匀,放置6 min,加4% NaOH溶液4 mL,用蒸馏水定容至10 mL,放置15-20 min,在510 nm波长处测定吸光度。每个浓度做三个平行实验,取平均值作标准曲线(图5)。以吸光值对浓度进行线性回归分析,求得回归方程:y =13.25x -3.1×10-3  R2 = 0.9998。
 
图5 总黄酮的标准曲线
1.7.3 样品总黄酮含量的测试方法
称取2 g样品,加入60 mL70%乙醇放于100 mL锥形瓶内,置于水浴锅上,70℃条件下回流提取60 min。过滤、定容于100 mL。
取1 mL稀释样品液于具塞试管中,分别加入4 mL 30%乙醇使成5 mL,然后分别加入5% NaNO2溶液0.3 mL,摇匀,放置6 min,再加10% Al(NO3)3溶液0.3 mL,摇匀,放置6 min,加4% NaOH溶液4 mL,用蒸馏水定容至10 mL,放置15-20 min,在510 nm波长处测定吸光度。根据回归方程算出测量液中总黄酮的浓度C(mg/mL),按照以下公式计算提取物黄酮的含量(mg/g)。
提取率(mg/g)=CVN/W
式中:C-测量液总黄酮浓度(mg/mL);V-粗提液体积(mL);N-为稀释倍数;W-原料干重(g)。
2.结果与讨论
2.1 大豆发芽时间与发芽率、芽长的关系
种子发芽率是种子播种品质最重要的指标之一,是种子分级和论价的重要依据。选择最佳发芽条件做好种子发芽实验,对农业生产有重要意义。同时,对种子发芽率做出科学评判,对种子经营和消费者也具有非常重要的意义。由表3可看出,随着发芽时间的延长,发芽率在不断上升,当到72 h时,发芽率已近100%。说明,黄豆在在三天的时间内已经能完全萌发。
由表3可知,大豆在发芽12 h时,芽长平均值为0.45cm。在发芽24 h时,芽长约为0.85 cm。可见,大豆在发芽前24 h时芽长增长速度较慢,在24 h以后发芽速度增快。在发芽72 h时,芽长平均值为9.65 cm。而且黄豆经3天发芽,文生素C、黄酮的含量都较高,吃之口感也特别好,若过了这一阶段,豆芽发得越长,其有益成分损失就越多。
表3 大豆发芽率、芽长与发芽时间的关系
处理条件    发芽率(%)    芽长(cm)
发芽12h    54    0.45
发芽24h    64    0.85
发芽36h    68    2.10
发芽48h    86    2.95
发芽60h    92    5.90
发芽72h    97    9.65
2.2 大豆发芽过程中可溶性蛋白质含量的变化
从图6可以看出,大豆发芽过程中可溶性蛋白质含量先降低而后又增加[13-14],其中发芽36h时含量最低为0.175 mg/g,其原因可能是由于发芽前的浸泡,使种子中的可溶性氮溶于水中,另一方面,种子在刚萌动时,蛋白酶活性突然升高,使贮藏蛋白进行水解,要消耗一部分蛋白质,故发芽36 h时,蛋白质含量减少。而发芽36 h后,随发芽时间的延长,蛋白质含量逐渐增加,主要是由于其他成分的消耗,种子发芽时新的蛋白质的合成,蛋白质的合成大于分解,但绝对增加量并不多。因此,总的变化规律是蛋白质先降低后慢慢增加,但增幅不是很大。
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