摘    要在食用甲鱼养殖过程中，由嗜水气单胞菌引起的疾病日益增多，已成为甲鱼养殖业发展的主要威胁，造成了巨大的损失。为预防嗜水气单胞菌的感染，本实验对食品级的乳酸菌表达载体进行改造，获得一个能够将外源基因表达并携带至细胞外，同时方便检测和定位目的蛋白表达的新的乳酸菌表达载体。同时，对一株高毒力的嗜水气单胞菌和低毒力的嗜水气单胞菌进行了蛋白质组测序分析，筛选候选疫苗基因。通过PCR扩增得到丝氨酸蛋白酶基因序列,将其克隆到乳酸菌诱导表达载体pNZ8149中,并转化得到融合载体pNZ8149-degQ。89534

During the culture of Chinese soft-shelled turtles, the diseases caused by Aeromonas hydrophila is increasing。 A。 hydrophila has become the main threat to the development of soft-shelled turtles culture, and has caused huge losses。 In order to defend the infection of A。 hydrophila, we constructed a food-grade Lactobacillus expression vector, which can carry and express exogenous genes。 The Lactobacillus expression vector can detect and localize of the exogenous genes expressed protein。 At the same time, a high virulence and a low virulence of A。 hydrophila were used for proteomic analysis。 So degQ was chosen as a candidate vaccine。 The sequence of degQ was amplified by PCR and cloned into the inducible Lactobacillus expression vector pNZ8149。

毕业论文关键词：食用甲鱼； 嗜水气单胞菌； 口服疫苗； 乳酸菌表达载体源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766 ； 丝氨酸蛋白酶

Key word: Chinese soft-shelled turtle;  Aeromonas hydrophila;  Oral vaccine; Lactobacillus expression vector;  degQ

目   录

摘    要 2

1。引言 4

2。材料与方法 4

2。1材料与试剂 4

2。1。1菌株与质粒 4

2。1。2培养基和生长条件 5

2。1。3主要试剂和材料 5

2。2试验与方法 5

2。2。1 TL1基因组DNA的提取 5

2。2。2 degQ基因的克隆 5

2。2。3 琼脂糖凝胶电泳 6

2。2。4 DNA琼脂糖凝胶回收 6

2。2。5 连接pEASY-T1载体 7

2。2。6 转化 pEASY-T1-degQ 7

2。2。7 菌落PCR 7

2。2。8 质粒提取 8

2。2。8。1 pEASY-T1-degQ质粒提取 8

2。2。8。2 pNZ8149质粒提取 9

2。2。9 质粒双酶切 9

2。2。9。1质粒pEASY-T1-degQ双酶切 9

2。2。9。2质粒pNZ8149的双酶切 9

2。2。10 pNZ8149-degQ的连接 10

2。2。11 转化目标载体pNZ8149-degQ 10

2。2。12 菌落PCR 10

2。2。13 目标载体pNZ8149-degQ鉴定 10

3。实验结果与分析 10

3。1 TL1基因组DNA的来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766 提取