摘要环境温度对变温动物的生理特征和生存状态具有重要的影响。热激蛋白是变温动物在热适应过程中重要的生物分子之一。热激蛋白70调节蛋白质内稳态的同时参与免疫应答。实验发现，PsHsp70在肌肉、肝脏、肾脏、脑、心、肺中均有表达。从26℃、28℃、30℃环境中孵化出来的新生甲鱼的热激蛋白70的表达水平仅有细微差异。但是病原菌可以诱导不同温度孵化的新生甲鱼，且肝脏中热激蛋白70的表达水平略微上调。在本研究中，我们将在分子生物学水平分析食用甲鱼的诱导性热激蛋白70。利用分光光度计检测，从大肠杆菌中分离纯化获得的PsHsp70（Heat shock protein 70 of Pelodiscus sinensis）具有明显的ATP酶活性。72789

这些结果显示PsHsp70可能在应对环境和生物学压力方面发挥作用，也可能参与免疫过程。

Abstract The physiological characteristics and survival of ectotherms are significantly influenced by the environmental temperature。 Heat shock proteins (Hsps) are the primary molecular factors that are associated with ectotherm thermal adaption。 Heat shock protein 70 (Hsp70) is involved in many aspects of protein homeostasis and in the immune response。It is found that the constitutive expression of PsHsp70 was detected in the muscle, liver, kidney, brain, heart and lung by expres-sion assay。 The PsHsp70 expression pattern slightly differed in hatchlings incubated at 26 °C, 28 °C, and 30 °C。 However, bacterial pathogens induced different levels of PsHsp70 expression in the livers of hatchlings incubated at 26 °C, 28 °C, and 30 °C。In this study, an inducible Hsp70 homologue (PsHsp70) from the soft-shelled turtle Pelodiscus sinensis was analysed at the molecular level。 The recombinant PsHsp70 was purified from Escherichia coli and showed apparent ATPase activity by spectrophotometric assay。 

These results suggest that PsHsp70 may play a role in coping with environmental and biological stresses and may be involved in the immune response。

毕业论文关键词：食用甲鱼；热激蛋白70；温度；嗜水气单胞菌；表达水平;

Key words:  soft-shelled turtles；Heat shock protein 70；temperature；Aeromonas Hydrophilia；expression level

目    录

引言 5

1材料与方法 6

1。1 菌株和培养条件 6

1。2 试剂与耗材 6

1。3 甲鱼卵的来源与孵化 6

1。4 Pshsp70基因的克隆 7

1。4。1基因的扩增及序列分析 7

1。4。2 基因的鉴定 8

1。5  TA 克隆 8

1。5。1  PCR产物回收纯化---胶回收 8

1。5。2 连接 8

1。5。3 转化及测序 9

1。6 表达载体（即重组质粒）的构建 9

1。7 蛋白纯化 10

1。7。1 重组蛋白的诱导表达 10

1。7。2 重组蛋白的纯化和浓缩 10

1。8 ATP酶活性的测定 10

1。9 PsHsp70在食用甲鱼中的表达 11

1。9。1 PsHsp70的组织特异性表达 11

1。9。2 不同孵化温度对PsHsp70表达的影响 11

1。9。3 细菌感染对PsHsp70表达的影响