1。2。5 RP-HPLC检测抗体对蛇毒亲和吸附强度 6

2 结果 7

2。1 实验室制备的抗体及其对蛇毒的吸附情况 7

2。2 商用抗体对蛇毒的吸附情况 9

3 讨论 10

参考文献 11

致谢 13

引言

毒蛇咬伤是一种突发性的急性中毒事件，病情变化快，症状凶险复杂[1]。及时、准确的治疗蛇伤已成为全球公共卫生安全关注的重点。随着抗体组学、毒理学逐步明确，抗蛇毒药物不断发展，抗蛇毒血清成为治疗毒蛇咬伤的特异性药物[2]。抗蛇毒血清是以蛇毒或类毒素为抗原，辅以免疫佐剂对实验动物反复进行注射免疫，动物机体受刺激后引起免疫细胞产生应答，最终由浆细胞合成具有与相应蛇毒抗原特异性结合并能中和其毒性的免疫球蛋白IgG[3]。抗蛇毒血清的疗效，无论是动物试验还是临床疗效，是世界公认的最有效的药物[4]。蛇毒成分的种内差异，例如种内毒蛇个体发育变异、地理变异以及个体变异的出现，表明利用混合蛇毒作为抗蛇毒血清生产免疫源的重要性；抗体组学技术也为鉴定蛇群的蛇毒成分构成质量和数量的个体差异提供了工具，从而提高了对蛇毒变异和地理分布的认识，保证蛇毒混合物具有更多的限定成分，从而生产出有效的抗蛇毒血清[5]。

抗蛇毒血清种类分为单价、双价和多价。仅含有一种蛇毒抗体的血清叫单价抗蛇毒血清。含有同属二种或多种蛇毒抗体的血清叫双价抗蛇毒血清。含有多属多种蛇毒抗体叫多价抗蛇毒血清。以多价抗蛇毒血清和单价抗蛇毒血清相比，单价血清优于多价血清。单价抗血清特异性高，且具有物种针对性，对相应毒蛇咬伤的治疗效果更佳。因为其具有高含量的特异性抗体免疫球蛋白，所以抗体的效价和纯度相对与多价抗蛇毒血清较高，但缺点是所中和的蛇毒种类较少，临床上必须在确诊被咬的毒蛇种类后，才能发挥其显著的疗效，在无法明确判断蛇伤类型的情况下需谨慎使用。多价抗血清的优点是中和蛇毒的种类较广，相对于单价抗蛇毒血清，它在临床更受欢迎。及早注射抗蛇毒血清对于蛇伤患者而言可有效控制中毒症状，防止系统性伤害的发生[6]。秦岭淮河以南具有丰富的毒蛇资源，毒蛇咬伤事件频发，临床治疗时往往对蛇伤患者注射抗五步蛇毒血清或商用抗蝮蛇毒血清，导致治疗效果大大降低，且容易引发患者产生许多不良症状。许多蛇伤高发地区由于自身技术落后或生产力不足，其临床用抗蛇毒血清常依赖进口。加之利润较低，需求量不稳定，一些工业化国家的抗蛇毒血清生产量也正逐年减少，这使得蛇伤高发地区的国家常常无法获得充足的抗蛇毒血清保障。使用多价抗蛇毒血清治疗蛇伤患者，可有效提高蛇伤的救治水平，同时减少病死率和致残率，减少药物的毒副作用[7]。来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766

鉴于临床用抗血清的生产和使用过程中存在许多不足，抗蛇毒血清的制备工艺完善、新型蛇伤治疗药物的研发工作以及对抗血清效价的评估也一直没有停止[8]。国内外目前常用的检测抗血清效价的方法有免疫双向扩散、酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫印迹试验（Western Blot）、溶血法以及最直接的动物试验法，但都只能获得简单的结果，而反相-高效液相色谱（RP-HPLC）是由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，适用于分离非极性、极性或离子型化合物。RP-HPLC不仅可以对抗体效价进行评估，还可以通过峰面积了解不同色谱峰下的样品的含量，样品经过色谱柱后不被破坏，还可以收集单一组分，收集后可进行定量定性分析。本研究以实验室自备的乡城原矛头蝮（Protobothrops xiangchengensis）、菜花原矛头蝮（Protobothrops jerdonii)和原矛头蝮（Protobothrops mucrosquamatus）三种蝮蛇蛇毒混合样品所制备的类毒素对实验大白兔皮下多点免疫注射所的多价抗蛇毒血清，与商用抗蝮蛇毒血清为对象，利用蛋白质组学和抗体组学等技术，去除抗蛇毒血清中与目的抗体不相关的成分，将蛇毒抗原和抗蛇毒血清一起进行孵育，分离抗血清中的抗体与抗原的反应后的结合与未结合组分，最后通过RP-HPLC对抗体效价进行评估。测定蛇毒毒素的免疫消耗、抗体的效价以及抗蛇毒血清与蛇毒的组织亲和力大小，可以在临床上进一步确定给药剂量及给药间隔时间，完成在不同蛇伤状态下合理使用抗蛇毒血清的给药方案。论文网