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    3.5  骨肉瘤7
    致谢8
    参考文献9
    犬肿瘤的细胞学诊断
    细胞穿刺是通过细针抽吸获得组织细胞样本的一项病理诊断技术。细针穿刺细胞病理学是对细针穿刺获取的样本进行细胞形态学及相关指标分析从而达到诊断的目的[ ]。虽然细针穿刺细胞病理学诊断具有时间短、方便、快捷等优点，已成为医学上广泛应用的成熟的诊断手段。但是兽医临床上细针穿刺细胞病理学诊断技术起步较晚，目前主要用于乳腺肿瘤、前列腺肿、皮肤肿瘤等体表肿块的检查[ ][ ][ ]。本课题收集临床病例中常见的犬的肿瘤，采用细针穿刺的方法获取样品，制备细胞涂片，通过吉姆萨瑞氏染色，观察细胞结构形态，判断肿瘤/非肿瘤性以及判断肿瘤的恶性程度，为临床上肿瘤的诊断、治疗和预后判断提供重要的依据。
    1  材料与方法
    1.1  材料
    1.1.1  样品的采集
        所有组织样品均采集自就诊于南京农业大学动物医院的患病犬。其中皮肤肿块（n=1），乳腺肿块（n=6），跗关节肿块（n=1），皮肤破溃（n=1），睾丸肿块（n=1），腋下肿块（n=1）。
    1.1.2  主要试剂
        Diff-Quik 染液，购自南京建成生物技术有限公司，瑞士-姬姆萨染液购自索莱宝生物技术有限公司。
    1.2  方法
    1.2.1  病例资料的收集
        对组织样品的信息进行收集，包括病例号、主人姓名、联系方式、动物种类、动物性别、年龄、疫苗接种情况、肿块发生部位、临床症状、实验室检查、影像学检查结果等信息进行详细的记录。
    1.2.2  细针抽吸取样
        采用两种穿刺技术，一种是无负压细针穿刺，采用20-22 G针头插入肿块组织反复2-3次，然后涂片；另外一种是有负压抽吸细针穿刺，用20-22 G针头链接5-10 mL注射器，插入组织中进行抽吸，然后涂片。
    1.2.3  细胞涂片的制备
        穿刺完毕，将注射器与针头分离，将注射器吸入部分空气，连接针头，将样本推出，滴于载玻片上，用另一干净的载玻片轻轻压在样本上，均匀展开，涂片。
    1.2.4  细胞涂片的染色
        Diff-Quick染色：涂片后自然风干，然后进行Diff-Quick染色，固定液中浸泡20s；染色液I中染10s；染色液II中染20s；蒸馏水或去离子水中洗10s然后镜检。
        瑞氏-姬姆萨复合染色法，滴加瑞氏-姬姆萨染色液，1-2min后加入等量的缓冲液，5-10 min蒸馏水水中洗，晾干然后镜检[ ]。
    细胞判读
    1.2.5  细胞涂片判读
        首先判断细胞的数量是否满足诊断的需要，然后判断细胞的，细胞是来源于上皮、间质和血液系统；细胞以何种形式排列；参照红细胞、白细胞判断细胞的大小；是否具有特殊的形态；细胞质深染、颗粒状还是透明；细胞核的大小，核质比例，核有丝分裂相，核内是否有包涵体；是否有坏死或炎性反应等，综合分析对细胞的良恶性做出判断[ ]。
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